O MONITORAMENTO DA HIDRÓLISE DE AMIDO E IDENTIFICAÇÃO DE AÇÚCARES REDUTORES

INTRODUÇÃO

Os carboidratos são importantes componentes da bioquímica, eles estão presentes em coisas comuns do dia-a-dia, como no açúcar, na farinha e nas frutas, também se encontram nos organismos, servindo de reserva energética para os seres humanos, ou na estrutura do DNA e do RNA. Existem 3 divisões dos carboidratos, que são os monossacarídeos, os oligossacarídeos e os polissacarídeos, indo do menos para o mais complexo, respectivamente.

Os monossacarídeos são as menores e mais simples unidades de carboidratos, não podendo se reduzir mais do que já são, o que confere a eles a característica de não serem hidrolisáveis. Eles têm em sua estrutura, geralmente, de 3 a 9 carbonos, podendo se ligar aos grupos funcionais das aldoses ou cetoses. Outra característica interessante desse grupo é que eles podem sofrer oxidação de agentes que contenham íons Cu2+, como por exemplo a solução de Fehling. Essa situação ocorre por conta da interconversão forma cíclica-forma aberta que se dá em solução, e por fim formando um grupamento aldeído, conferindo a eles o poder redutor.

Existem ainda os oligossacarídeos e os polissacarídeos. As maiores diferenças entre eles é que os oligossacarídeos têm em sua estrutura de 2 a 10 monossacarídeos, ligados por ligação O-glicosídica, e possuem sabor doce, e os polissacarídeos têm mais de 10 monossacarídeos na sua estrutura e não tem sabor nenhum, mas tem algumas moléculas de grande importância para a bioquímica nesse grupo, tais quais: glicogênios, amidos e celuloses. É importante destacar que ambos são hidrolisáveis, diferentemente do monossacarídeo.

OBJETIVO

A prática teve dois objetivos principais, sendo o primeiro o monitoramento da hidrólise do amido, devendo-se observar como o amido reagiria com HCl, onde alíquotas dessa solução foram submetidas aos testes de Iodo e de Fehling A e B. O segundo objetivo era a identificação dos açúcares redutores, misturando soluções de lactose, maltose e sacarose ao Fehling A e B e os colocando sob aquecimento para enfim realizar a identificação.

MATERIAIS E MÉTODOS

I) Aparelhagem e materiais utilizados:

Tubos de ensaio 10 x 150 mm e 15 x 190 mm;

Banho de água à 80ºC;

Pipetas (de 1, 2 e 10 mL);

Bastão de vidro;

Conta-gotas;

Vidro de relógio;

Espátula;

Estante para tubos de ensaio.

II) Reagentes:

Amido comercial;

Ácido Clorídrico 3N;

Reagente de Fehling (A e B);

Solução de Lugol;

Água destilada;

Soluções à 4% de Lactose, Sacarose e Maltose.

III) Métodos:

1. Monitoramento da Hidrólise de amido

De maneira inicial, pesou-se 0,5 g de amido comercial, com o vidro de relógio, em uma balança científica. No mesmo momento, foram adicionados, com uma pipeta de 10 mL, 15 mL de HCl (ácido clorídrico) 3N em um tubo de ensaio 15 x 190 mm. Em seguida, verteu-se 0,5 g de amido no tubo contendo HCl, e para que a solução fosse homogeneizada, o bastão de vidro foi utilizado. Dessa solução, foi coletado 1 mL com uma pipeta, do qual, duas alíquotas de 0,5 mL foram transferidas para dois tubos de ensaio 10 x 150 mm, que continham 0,5 mL de água destilada cada.

No momento seguinte, a suspensão de amido foi colocada sob aquecimento (80°C) por 60 minutos e homogeneizada novamente, de 1 em 1 minuto pelos primeiros 10 minutos. Nos tempos da solução sob aquecimento por 10, 20, 40 e 60 minutos, foram coletadas alíquotas de 1 mL, das quais 0,5 mL foram adicionadas em dois tubos de ensaios, contendo 0,5 mL de água destilada cada, repetindo o processo anterior.

As alíquotas dos 5 tempos da hidrólise foram separadas em dois grupos, definidos grupo A e B. Os tubos pertencentes ao grupo A, foram submetidos ao Teste de Iodo, então tiveram 2 gotas de Lugol adicionadas em cada um. Nos tubos do grupo B, foi realizado o Teste de Fehling, onde 1 mL de Fehling A e 1 mL de Fehling B foram acrescentados aos tubos que, em seguida, foram agitados e colocados sob aquecimento em banho por 5 minutos. As reações ocorridas em cada situação foram observadas.

2. Identificação de Açúcares Redutores

Para a identificação dos açúcares redutores, foram utilizadas as soluções à 4% de Lactose, Sacarose e Maltose. 1 mL de cada solução foi adicionado em um tubo de ensaio com o auxílio de uma pipeta. As 3 alíquotas foram submetidas ao Teste de Fehling, onde foram acrescentados 1 mL de Fehling A e 1 mL de Fehling B, que posteriormente foram agitados e postos sob aquecimento em banho por 5 minutos. As reações foram observadas novamente.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

1. Monitoramento da Hidrólise de amido

t (minutos)

Teste de Iodo (A)

Teste de Fehling (B)

0(1)

Preto arroxeado

Azul cobalto

10(2)

Preto arroxeado

Azul + precipitado vermelho

20(3)

Preto esverdeado

Azul claro + precipitado vermelho

40(4)

Marrom âmbar

Amarelo + precipitado vermelho

60(5)

Amarelo

Laranja + precipitado vermelho

Tabela 1 - Conclusão das alterações ocorridas nos tubos de ensaio.

Os resultados obtidos indicam que o aquecimento da solução de amido em presença de HCl causa a hidrólise das ligações glicosídicas α(1 → 4), sem ramificação, e α(1 → 6), com ramificação. Em função do tempo de hidrólise, são encontrados como produtos intermediários as maltodextrinas