Desnaturação

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO                                                                                               3

2 OBJETIVO                                                                                                        3

2.1 OBJETIVO GERAL                                                                                       3

2.2 OBJETIVO ESPECÍFICO                                                                            4

3 MATERIAIS E MÉTODOS                                                                             4

4 RESULTADOS E DISCUSSÕES                                                            6

5 CONCLUSÃO                                                                                                   9

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS                                                                10

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1. INTRODUÇÃO

Proteínas são polímeros formados pela união de aminoácidos, por meio de ligações peptídicas. São constituídas por carbono, oxigênio, nitrogênio e hidrogênio, podendo ou não apresentar enxofre1. A porção dos aminoácidos que se encontra incorporados à cadeia polipeptídica é denominada resíduo, os quais diferem entre si em função da natureza de sua cadeia lateral (R). Esses resíduos de aminoácidos localizados na superfície da proteína são responsáveis pelo comportamento ácido básico e pela solubilidade, variando com o pH, temperatura, força iônica e constante dielétrica2.

Quanto à estrutura, quatro tipos devem ser considerados para definir a sua estrutura: estrutura primária, secundária, terciária e quaternária3. A singular estrutura tridimensional da conformação nativa é determinada por sua estrutura primária, isto é, a sua sequência de aminoácidos. As interações entre as cadeias laterais dos aminoácidos direcionam o dobramento da cadeia polipeptídica para formar as estruturas secundárias, terciárias e quaternárias, as quais cooperam para a estabilização da conformação nativa da proteína. A desnaturação protéica resulta no desdobramento e na desorganização dessas estruturas, sem que haja hidrólise das ligações peptídicas. A desnaturação pode ser reversível, ou, mais frequentemente, irreversível4.

O fato é que as proteínas são componentes essenciais a todas as células vivas e estão relacionadas praticamente a todas as funções fisiológicas, como na regeneração de tecidos; catalisadores de reações químicas que se dão nos organismos vivos e envolvem enzimas e hormônios; são necessárias nas reações imunológicas e, juntamente com o ácido nucléico, são indispensáveis nos fenômenos de crescimento e reprodução3.

1. OBJETIVO

1. OBJETIVO GERAL

Observação a ação de agentes precipitantes e desnaturantes de proteínas.

1. OBJETIVO ESPECÍFICO

Analisar o comportamento da ovoalbumina sob o efeito de diversos fatores: temperatura, soluções salinas concentradas, reagentes alcalóides e solventes orgânicos. Expondo-a diferentes condições, favorecendo a sua precipitação e desnaturação.

1. MATERIAIS E MÉTODOS

a) Precipitação de proteínas por ação de ácidos fortes, metais pesados e reagentes alcalóides

Reagentes e soluções:

• Solução de albumina (clara do ovo)
• Solução de HNO3 concentrado
• Solução de CuSO4 a 10%
• Solução de ácido tricloroacético

Vidraçaria e instrumental:

• Pipeta
• Tubo de ensaio

Procedimento:

1. No tubo 1 colocar 1 mL (20 gotas) da solução de proteína (albumina – clara do ovo). Adicionar 1 mL (20 gotas) da solução de HNO3 concentrado. Observe o resultado.
2. No tubo 2 colocar 2 mL (40 gotas) da solução de proteína (albumina – clara do ovo). Adicionar gota a gota (5 a 10 gotas) da solução de CuSO4 10%. Observe o resultado.
3. No tubo 3 colocar 2 mL (40 gotas) da solução de proteína (albumina – clara do ovo). Adicionar gota a gota (5 a 10 gotas) da solução de ácido tricloroacético. Observe o resultado.

b) Precipitação de proteínas por ação do calor

a) Solução:

• Solução de albumina (clara do ovo)

b) Vidraçaria e instrumental:

• Pipeta
• Tubo de ensaio
• Banho-maria

c) Procedimento: 

Pipetar 1 mL (20 gotas) de solução de albumina num tubo de ensaio 4 e aquecer em banho-maria a 100º. Observe o resultado.

c) Precipitação de proteínas por ação do solvente orgânico

Reagente e solução:

• Solução de albumina (clara do ovo)
• Acetona

Vidraçaria e instrumental:

• Pipeta
• Tubo de ensaio

Procedimento: 

Pipetar 1 mL (20 gotas) de solução de albumina num tubo de ensaio 5 e acrescentar 1 mL (20 gotas) de acetona. Observe o resultado.

d) Precipitação de proteínas pelo efeito “Salting-out”

Reagente e solução:

• Solução de albumina (clara do ovo)
• Sulfato de amônio (solução saturada)

Vidraçaria e instrumental:

• Pipeta
• Tubo de ensaio

Procedimento: 

Pipetar 1 mL (20 gotas) de solução de albumina num tubo de ensaio 6 e acrescentar 1 mL (20 gotas) de solução saturada de sulfato de amônio. Observe o resultado.

1. RESULTADOS E DISCUSSÕES

Procedimento	Tubos	Soluções	Resultados
A	1	1 mL Albumina + HNO3 1mL	Precipitação coloração amarela / Desnaturação
2	Albumina 2 mL + CuSO4	Precipitação / Desnaturação
3	Albumina 2 mL + Ác. Tricloroacético	Precipitação / Desnaturação
B	4	Albumina 2 mL + Calor 100º	Coagulação
C	5	Albumina 1 mL + Acetona 1 mL	Precipitação / Desnaturação
D	6	Albumina 1 mL + Sulfato de Amônia 1 mL	Precipitação / Desnaturação