ELISA SANDUÍCHE PARA HIV-1 E HIV-2 E TESTE DE GRAVIDEZ

INTRODUÇÃO

O método de ELISA é um teste imunoenzimatico, baseado na reação de anticorpo se ligando a antígeno, é utilizado para a detecção de doenças infecciosas, autoimunes e alergias.

Existem diversos tipos de ELISA, o de maior simplicidade é também conhecido como ELISA indireto, que ocorre da seguinte forme: a placa ELISA contem o antígeno fixado, em seguida é adicionado o soro do paciente,em caso de soro positivo, os anticorpos produzido pelo corpo se ligarão as partículas de HIV presentes na placa, para a confirmação é adicionado um anticorpo marcado por peroxidase, logo após adiciona-se o cromógeno para reação com a enzima para facilitar a visualização através da cor azul, o ultimo composto a ser adicionado a placa é a solução stop para que ocorra mudança da coloração obtida para amarelo ,sendo então possível a identificação da quantidade através dos tons apresentados.

Kit.

• Microplaca com cavidades cobertas com proteínas de HIV-1 e HIV-2

• Solução de lavagem (tampão salino-fosfato (PBS), pH7,4 e tween-20 como detergente)

• Conjugado de anticorpo marcador com peroxidase (pronto para uso)

• Substrato cromógeno-solução A (pronto para uso) responsável pela cor azul

• Substrato cromógeno-solução B (pronto para uso) responsável pela cor azul

• Solução stop (pronto para uso) responsável pela cor amarela

• Soro controle negativo (soro humano negativo para HIV-pronto para uso)

• Soro controle positivo (soro humano positivo para HIV-pronto para uso)

• Solução tampão diluente

• Padrão: solução de concentração conhecida de referência

Material

• Micropipeta 50uL e 100uL

• Água destilada

• Incubadora 37°C

• Papel absorvente.

• Luvas.

• Ponteiras

Procedimento para controles e amostras

1. Usou-se ponteiras individuais para cada pipetagem, evitando com isso contaminação

2. Dispensou-se 100 uL de SORO CONTROLE NEGATIVO (-) em 3 poços

3. Dispensou-se 100 uL de SORO CONTROLE POSITIVO (+) para HIV-1 em 2 poços

4. Para o Blanck, dispensou-se 50 uL de solução A e 50 uL de solução B

5. Dispensou-se 100 uL de AMOSTRA SORO nas cavidades a serem testadas em duplicata

6. Homogenizou-se levemente, batendo com os dedos nas bordas da placa.

7. Cobriu-se a placa com folha adesiva e incubou-se por 30 minutos a 37°C

8. Lavou-se a microplaca