Teste Elisa

4. Coleta de amostra e armazenamento

1) Coletar a amostra de sangue total utilizando anticoagulante

adequado.

2) Centrifugar o sangue total para obter amostra de plasma ou

de soro.

3) Se as amostras não são testadas imediatamente, podem ser

refrigeradas de 2 - 8ºC. Recomenda-se congelar as amostras

por períodos maiores que 3 dias. Trazer as amostras à

temperatura ambiente antes do uso.

4) Amostras contendo precipitados podem produzir resultados

inconsistentes. Tais amostras devem ser clarificadas antes

do ensaio.

5. Procedimento

1) Preparar as tiras: 3 cavidades para o Controle Negativo, 2

cavidades para o Controle Positivo e cavidades para

amostras. 434/P7 2

2) Pipetar 100 µl de diluente da amostra em cada cavidade.

3) Adicionar 50 µl de Controle Negativo, Controle Positivo e

amostras nas cavidades correspondentes.

4) Cobrir a microplaca com selo adesivo e misturar bem no

agitador por vibração. A agitação é importante para obter

reprodutibilidade nos resultados.

5) Incubar as cavidades a 37ºC por 60 minutos.

6) Lavar as cavidades 5 vezes com 350 µl de solução para

lavagem diluída.

Aspirar todo o líquido das cavidades.

7) Pipetar 100 µl de conjugado enzimático diluído em cada

cavidade.

8) Cobrir a microplaca com selo adesivo.

9) Incubar as cavidades a 37ºC por 30 minutos.

10) Lavar as cavidades 5 vezes com 350 µl de solução para

lavagem diluída.

Aspirar todo o líquido das cavidades.

11) Pipetar 100 µl de solução substrato diluído em cada

cavidade.

12) Incubar as cavidades por 30 minutos à temperatura

ambiente.

13) Pipetar 100 µl de solução bloqueadora em cada cavidade.

14) Ler a absorbância das cavidades em um espectrofotômetro

bicromático a 450 nm com comprimento de onda de

referência a 620 nm. A leitura deve ser realizada dentro de 1

hora do término do ensaio.

6. Interpretação dos resultados

1) Validação do teste

Os valores individuais da absorbância para o soro controle são

utilizados para calcular o valor médio onde:

-0,010 ≤ A (neg.) ≤ 0,200

A (pos.) ≥ 1,000

Se um dos valores de absorbância do Controle Negativo estiver

fora da especificação, este valor pode ser desprezado.

Os valores de absorbância do Controle Positivo devem estar

conformes com a especificação.

Se estes valores não forem obtidos, o teste deverá ser repetido.

2) Avaliação

Calcular