MONÓXIDO DE CARBONO: DETERMINAÇÃO DE CARBOXIEMOGLOBINA SANGUÍNEA POR ESPECTROFOTOMETRIA

1. INTRODUÇÃO

O CO é um gás incolor, inodoro e insípido, muito difusível, resultante da combustão incompleta da matéria orgânica. Torna-se altamente perigoso e fatal quando produzido ou libertado em espaços fechados ou semifechados com ventilação inadequada. Este gás é rapidamente absorvido ao nível de alvéolo pulmonar, tem alto poder de difusão plasmática e avidamente se fixa à hemoglobina (proteína que transporta o Oxigênio no sangue). O CO tem uma afinidade maior pela hemoglobina que o O2, isto faz com que a Hemoglobina passe a transportar CO em vez de O2.

A intoxicação por CO produz principalmente hipóxia tissular, resultante do transporte diminuído de O2, trazendo tais sintomas como: sonolência e Cefaleias (primeiros sintomas), agitação e confusão mental, Taquicardia, Hipertensão ou Hipotensão e em casos extremos o coma. Intoxicação aguda – a absorção do CO e os sintomas resultantes dependem da concentração do mesmo no ar expirado, do tempo de exposição no ambiente contaminado e da atividade do indivíduo exposto, ou melhor, do ritmo respiratório.

A carboxihemoglobina (COHb) é o indicador da exposição ao monóxido de carbono, e a concentração de COHb no sangue de um indivíduo exposto é proporcional à concentração de monóxido de carbono no ambiente e ao tempo de exposição, sendo classificado como indicador biológico de dose interna de exposição. A caracterização da exposição pode ser feita pela determinação da quantidade do xenobiótico absorvido, através da medida de sua concentração ao nível de órgãos, células ou moléculas alvos. Se for conhecida a relação entre a dose interna e os efeitos tóxicos, a medida de um parâmetro biológico pode prover uma avaliação direta do risco à saúde.

Vários são os métodos propostos para a determinação da COHb. Dentre eles, os espectrofotométricos têm sido os mais utilizados pelo seu baixo custo, rapidez e simplicidade, tendo por base a absorção diferencial da COHb e da hemoglobina reduzida, obtida por tratamento da amostra com ditionito de sódio. Havendo a necessidade de serem estabelecidos previamente os fatores de calibração do espectrofotômetro usado.

2. OBJETIVOS

A dosagem quantitativa da carboxiemoglobina tem como objetivo quantificar a concentração desta substância que é um indicativo de exposição a monóxido de carbono, assim avaliar como se comportam frente a toxicidade e probabilidade de sobrevivência à exposição.

3. METODOLOGIA

• Solução tampão fosfato (KH2PO4/K2HPO4 0,1M) pH6,8:

Usou-se água destilada no preparo desta solução, conservada com recipiente de plástico (onde é estável) e pode-se armazenar em temperatura entre 4 e 8ºC por vários meses.

• Solução hemolisante:

Diluiu-se o tampão fosfato com água destilada na proporção de 1:10

• Solução tampão redutora:

Dissolveu-se 25mg de ditionito de sódio (Na2S2O4) em 20 ml de solução tampão fosfato. Esta solução foi prepara imediatamente antes do uso.

• Material necessário:

Espectrofotômetro operando em comprimento de onda de 420 e 432 nm. Pipetas automáticas. Tubos de ensaio.

• Amostra:

O sangue de um indivíduo fumante foi colhido em sistema de coleta de sangue à vácuo em recipiente contendo Heparina/ EDTA e conservado a 4ºC. A amostra de sangue deve ser colhida ao final da jornada de trabalho para a monitorização da exposição ocupacional. Para os fumantes devem ser colhidas, antes e após a jornada de trabalho.

• Procedimento:

Em um tubo de ensaio com tampa, colocou-se 100 microlitros de sangue e 12ml de solução hemolisante. Agitou-se por inversão três vezes e o sistema foi deixada em repouso por 5 minutos. Efetuou-se a leitura em espectrofotômetro nos comprimentos de onda de 420 e 432 nm e anotou-se as respectivas absorbâncias.

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO

NF Amostra F Absorbância

0,697 1 (420 nm) 1,017

0,321 2 (432 nm) 0,464

% CoHb = 1 – (AR x F1)

AR x (F2 – F1) – F3 +1

Onde:

F1 = 1,3330 AR = A420nm

F2 = 0,4781 A435nm

F3 = 1,9939

AR = 2,1918

% COHb = 1 – (2,918 x 1,3330)

2,918 x (0,4781 – 1,3330) – 1,9939 + 1

% COHb = 1 – 2,9216

2,1918 x ( -0,8549) – 1,9939 +1

% COHb = - 1,9216

- 1, 8737 – 0,9939

% COHb = - 1,9216

- 2,8676

%COHb = 0,6701

O Índice Biológico Máximo Permitido é 3,5%, ou seja a amostra analisada deveria ser igual ou superior a esse valor, pois o indivíduo do qual a amostra foi coletada é fumante e consequentemente exposto ao monóxido de carbono. Porém o valor encontrado de carboxiemoglobina foi inferior ao Valor de Referência do indivíduo não exposto que é 1,5%. Esse valor pode ter sido encontrado devido a erros na coleta ou no procedimento. O método é pH dependente e uma variação na solução tampão pode gerar erros e também o agente