Metahemoglobinemia

Relatório de Aula Prática: Agentes Metahemoglobinizantes.

1. Agente Tóxico

Agentes Metahemoglobinizantes são substâncias capazes de induzir a oxidação de um dos átomos de ferro da hemoglobina, passando do estado ferro II para o estado ferro III. Esta oxidação resulta em um pigmento chamado metemoglobina (MHb), que é incapaz de transportar oxigênio. Portanto, quantidades elevadas de metemoglobina é incompatível com a vida.

A metemoglobina possui cor castanha avermelhada e seu pico de absorbância é de 630 nm em pH ácido.

As hemácias possuem normalmente pequenas quantidades de metemoglobina, devido sua oxidação espontânea. Entretanto, elas possuem sistemas redutores capazes de restaurar a função da hemoglobina, mantendo assim os níveis de MHb em torno de 1%.

São exemplos de agentes metahemoglobinizantes: nitritos, nitratos, cloratos, quinonas, anilina e derivados, fenacetina, acetanilida, nitrobenzeno, nitrotolueno e algumas sulfonamidas.

1.1. Amostra:

Sangue.

1.2. Estrutura Química:

2. Fundamento

A metodologia empregada para análise de metemoglobina foi descrita primeiramente por Evelyn-Malloy (1938)26, posteriormente foi modificada por J. Meunier (1972) e atualizada por Carrazza (1998)20, na qual a dosagem de metemoglobina no sangue venoso é realizada através do espectrofotômetro no visível.

Essa técnica se fundamenta no princípio que os pigmentos sanguíneos oxiemoglobina, deoxiemoglobina, metemoglobina e cianometemoglobina, possuem absorção máxima em comprimentos de ondas semelhantes, mas cada pigmento têm picos de absorção menores, porém significativos em diferentes comprimentos de onda.

2.1. Reação Química:

Hb-Fe2+ + O2 → MHb-Fe3+ + O2

3. Técnica Analítica: Fluxograma

4. Resultados e Discussão

Amostras 1ª Porção 2ª Porção MHb (%)

1ª Leitura (A1) 2ª Leitura (A2) 1ª Leitura (A3) 2ª leitura (A4)

1 0,060 0,042 0,408 0,090 05

2 0,406 0,077 0,412 0,085 100

3 0,438 0,087 0,458 0,113 100

4 0,471 0,129 0,664 0,145 67,53

5 0,386 0,111 0,578 0,156 52,68

A metemoglobina possui uma absorção pequena, porém exclusiva no comprimento de onda de 630 - 635 nm, obtendo-se neste comprimento de onda uma absorvância proporcional à concentração de metemoglobina na amostra. Foram realizados um total de quatro leituras, realizando pequenas modificações em cada uma delas, com o objetivo de anular a ação de outros pigmentos presentes na amostra.

Na primeira leitura (A1) usando espectrofotômetro a 365 nm, a amostra foi tratada com saponina, tampão fostato pH 6,6 e não teve alteração da composição dos pigmentos sanguíneos presentes no sangue. A segunda leitura (A2) é realizada na amostra anteriormente descrita com adição de cianeto de potássio a 10%, que levará a transformação da MHb à cianometemoglobina, que nesse comprimento de onda possui uma absorvância mínima. Portanto, o valor obtido é devido os pigmentos residuais da hemoglobina, e a diferença da primeira leitura com a segunda fornecerá a verdadeira proporção da concentração de metemoglobina presente na amostra.

A terceira leitura (A3) (2ª porção) realizada foi da amostra tratada com uma solução de ferricianeto de potássio, que ao contato com a hemoglobina promove a oxidação do ferro levando a formação de MHb que fornecerá um valor de absorvância. Na quarta leitura (A4) foi acrescentado à solução anterior uma solução de cianeto de potássio a 10% para novamente promover a leitura residual de outros pigmentos da hemoglobina. A diferença entre a terceira e quarta leitura é proporcional a concentração da metemoglobina gerada “in vitro”.

Assim, com a obtenção desses valores, foi possível aplicar na fórmula abaixo para estimar a porcentagem de metemoglobina presente em cada amostra e concluir se tais níveis estão conformes ou não com o preconizado pela NR-07 (< 2%).

% MHb = AbsMHb – AbsHbCN / Abs100% - AbsHbCN x 100

O nosso grupo realizou o procedimento com a amostra 2, que ao aplicar os valores de absorvância encontrado nas 4 leituras, na fórmula acima, obteve-se um valor de MHb de aproximadamente 100%.

O tratamento das amostras com saponina (ou Triton X) teve por objetivo obter uma solução hemolisada sem turbidez, o que garante maior precisão às leituras efetuadas. A decisão terapêutica de metemoglobinemia deve ser orientada primariamente pelo quadro clínico do paciente, sendo que o nível sangüíneo da MHb tem importância secundária na definição da conduta. Quando o quadro