Relatório Microbiologia- Coloração Gram

Coloração de Gram é uma técnica de coloração para diferenciação de micro-organismos através das cores, para serem observados em microscópio óptico. A técnica recebeu este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram.

Nesta pratica realizamos os procedimentos de coloração de Gram, foram feitas duas lâminas com coloração distinta, e os resultados foram observados no microscópio.

Todo procedimento de fixação do corante e observação das lâminas foram detalhados no decorrer do relatório.

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SUMÁRIO

01 – INTRODUÇÃO -------------------------------------------------------------------------- 04

02 – OBJETIVOS ----------------------------------------------------------------------------- 05

03 - MATERIAIS E MÉTODOS ------------------------------------------------------------ 06

3.1 – Materiais

3.2 - Métodos

04 - RESULTADO E DISCUSSÃO ------------------------------------------------------- 09

05 – CONCLUSÃO --------------------------------------------------------------------------- 11

REFERÊNCIAS -------------------------------------------------------------------------------- 12

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1- INTRODUÇÃO

A coloração de Gram é usada para classificar as bactérias em relação à forma, tamanho, morfologia celular e propriedade tintorial. A coloração de Gram foi originalmente descrita por Christian Gram em 1884 e modificada por Hucker em 1921, comumente usada na prática bacteriológica devido proporcionar uma melhor estabilidade dos reagentes e melhor diferenciação dos microrganismos. O método de Gram se baseia no fato de que quando certas bactérias são coradas pelo o cristal violeta (corante azul) e depois tratadas pela solução de lugol, forma-se um composto de coloração escura entre o iodo e o corante, que é fortemente retido por um grupo de bactérias e não pode ser removido pelo descoramento com o álcool – Gram positiva. Outras bactérias, denominadas Gram negativas, deixam-se descorar facilmente pelo álcool. Então, as bactérias Gram negativas aparecerão coradas em vermelho, ao passo que as Gram positivas aparecerão coradas em roxo.

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2- OBJETIVOS

Os objetivos desta prática é aprender a técnica de colocação Gram e seu fundamento, bem como saber diferenciar as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas.

Desenvolver habilidades para executar as técnicas de preparação de esfregaços e para o método de coloração de Gram, sabendo diferenciar e classificar as bactérias de acordo a coloração obtida e relacionando-as à composição química da parede celular das mesmas. Reconhecer as bactérias, citar suas formas e descrever seus arranjos. Desenvolver, também, a habilidade de utilização do microscópio óptico, observando as bactérias após a coloração de Gram.

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3- MATERIAIS E METODOS

3.1- Materiais

 Placas de Petri contendo culturas bacterianas: Escherichia coli e Staphylococcus aureus;

 Solução salina;

 Solução de Lugol;  Solução de Cristal de violeta;  Solução de fucsina  Cabo de Cooler com alça de platina em formato ‘o’;  Álcool concentrado (98,2%);  Pisseta com água;  Bico de Bunsen;  Lâminas de microscopia;  Cuba de vidro;  Pinça;

 Microscópio óptico;  Papel Toalha;  Óleo de imersão;

3.2- Métodos

Antes de darmos início a aula prática, foram realizados os procedimentos básicos de higiene e assepsia, bem como conferir a organização da bancada em que será realizada o experimento.

Iniciemos a parte experimental com uma pinça, para retirar uma lâmina de dentro do frasco contendo álcool e flambá-la, superficialmente no fogo, assim que isso for feito, deixar a lâmina sobre um papel toalha, próximo ao bico de Bunsen. Lembrando que, durante todo o procedimento no bico de Bunsen, deve-se respeitar um raio de segurança de 15 cm a 20 cm do fogo. Também devemos flambar o cabo de Koole com alça de platina, ou alça de inoculação.

Em seguida, com a alça vamos retirar um pouco de solução salina do recipiente e colocar no centro da lâmina e espalhar. Feito isso, deve-se flambar

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novamente a alça. Pegamos a primeira placa de petri contendo uma colônia de bactéria, recolhemos o material com a alça de platina e passamos sobre a lâmina, ou seja, realizar o esfregaço sobre a solução salina. Depois a alça de platina deve ser flambada novamente.

Com uma pinça, pegamos a lâmina e passamos, superficialmente, sobre a chama do bico de Bunsen, ter o cuidado de passar sobre o fogo apenas a parte de baixo da lamina, depois devemos colocar a lâmina sobre uma cuba de vidro para que possa ser corada.

Figura 01

Inicialmente, foi colocado o corante Cristal de violeta no material e deixamos agir por três minutos, tempo suficiente para que o corante possa ser fixado na lâmina. Enquanto se passava os três minutos, todo o procedimento de fixar o corante na lâmina foi repetido, no entanto, ao invés de recolher o material da primeira placa de Petri, foi recolhido de uma segunda placa e o material que nela contém é utilizado.

Passados três minutos, foi colocada solução de Lugol por cima do Cristal de violeta na lâmina e deixado agir por mais dois minutos. (Lembrando que o procedimento é repetido para o material recolhido na segunda placa de petri). Assim que se passam os dois minutos, com uma pisseta