O MÉTODO PARA QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE[pic 1][pic 2]

CURSO DE ENGENHARIA BIOQUÍMICA

                DISCIPLINA DE BIOQUIMICA I

MÉTODO PARA QUANTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS

Francine Kerstner (70534)

Bruno Roswag (70559)

Renata Borges (71769)

Fernanda Rojas (70563)

Rio Grande, 2015

LISTA DE ILUSTRAÇÕES

LISTA DE TABELAS

SUMÁRIO

1 INTRODUÇÃO......................................................................................................................

2 OBJETIVO............................................................................................................................

3 MATERIAL E MÉTODOS.....................................................................................................

3.1 Material...............................................................................................................................

3.2 Reagentes e Soluções .......................................................................................................

3.3 Procedimento Experimental................................................................................................

4 RESULTADOS E DISCUSSÃO.............................................................................................

5 CONCLUSÃO......................................................................................................................

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.......................................................................................

1 INTRODUÇÃO

Proteínas são heteropolímeros formados por unidades menores chamadas aminoácidos. Os aminoácidos estão ligados em sequência formando uma cadeia polipeptídica, esta cadeia é a base da proteína e é chamada de estrutura primária (UNICAMP).

As proteínas são extremamente importantes na nutrição porque fornecem aminoácidos essenciais ao organismo. Os aminoácidos são chamados essenciais, pois o organismo não é capaz de sintetizá-los, na digestão há a quebra da cadeia de proteínas e os aminoácidos livres são absorvidos e usados na síntese de novas proteínas. São aminoácidos essenciais: valina, leucina, isoleucina, metionina, fenilalanina, triptofano, treonina, lisina, arginina, histidina (UNICAMP).

O desenvolvimento de metodologias e estudos comparativos de metodologias espectrofotométricas para a determinação de proteínas sempre foram de grande interesse para profissionais, tanto ligados à indústria de alimentos, laboratórios de análises clínicas, como para pesquisadores de diversas áreas. (Zaia et. al, 1998)

Muitos métodos espectrofotométricos, ao longo dos anos, têm sido propostos para a determinação de proteínas, mas não existe uma metodologia considerada de uso universal para todos os meios. Os métodos geralmente mais utilizados são o do Biureto, de Lowry, reagente de Bradford, entre outros (Zaia et. al, 1998).

            A quantificação precisa de proteínas é essencial para todo tipo de experimento que trabalha com elas, em várias áreas como biologia molecular e celular, bioquímica, biologia do desenvolvimento e neurociências. Desde o século passado métodos de quantificação diferentes foram desenvolvidos, devido a sua ampla utilização (Johnson et. al, 2012)

O método do Biureto depende da presença de ligações peptídicas em todas as proteínas, é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre em solução, sendo o tartarato de sódio. O cobre, em meio alcalino, reage com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação peptídica. O produto de reação apresenta duas bandas de absorção, uma em 270 nm e outra em 545 nm. Apesar da banda na região de 270 nm aumentar em seis vezes a sensibilidade do método do Biureto, a banda na região de 540 nm é a mais utilizada para fins analíticos, porque diversas substâncias, normalmente presentes na maioria dos meios analisados, absorvem na região de 270 nm causando muita interferência no método. (Zaia et. al, 1998)

             A intensidade da cor produzida é proporcional ao número de ligações peptídicas que estão reagindo e, portanto, à quantidade de proteína presente no sistema reacional. (Burtis et. al ANO? ). Aminoácidos e dipeptídeos não reagem, mas tripeptídeos, oligopeptídeos e polipeptídeos reagem e produzem produtos de cor rosa à violeta avermelhado. (Burtis et. al )

             Apesar de ser um método rápido, por utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas, este método não é muito sensível, colocando-o em grande desvantagem, em relação a outras metodologias, e por isto tem sido, ao longo dos anos, substituído por métodos mais sensíveis (Zaia et. al, 1998).