A Biologia Molecular

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO TRIÂNGULO MINEIRO INSTITUTO DE CIÊNCIAS EXATAS, NATURAIS E EDUCAÇÃO CIÊNCIAS BIOLÓGICAS - LICENCIATURA

Sarah Maluf Souza

Biologia Molecular

Profa. Dra. Mariangela Torreglosa Ruiz Cintra

(2023.2)

UBERABA MG 2023

• Objetivos:

Prática 01 – Biossegurança

• Avaliar as diferentes condições de biossegurança de um laboratório;

Prática 02 - Equipamentos de laboratório, Instrumentação para uso do laboratório

• Avaliar os diferentes equipamentos em um laboratório de biologia molecular;
• Aprender a transferir pequenos volumes com precisão: técnica de pipetagem ;
• Realizar treinamento volumes de soluções;
• Realizar diluição seriada;

Prática 03 – Extração de DNA Genômico

• Avaliar a técnica de extração de DNA com aplicação para o ensino de biologia nos ensinos fundamentais.

Prática 04 – Extração de DNA total de Escherichia coli

• Isolar DNA de Escherichia coli utilizando o método modificado de Marmur ( J. Mol. Bio. 3: 208,1961)

• Diferenças entre Procarioto e Eucarioto:

As células eucariontes contém organelas ligadas a membranas (como o núcleo e as mitocôndrias), enquanto as células procariontes não têm. O DNA nas células eucariontes é encontrado dentro do núcleo, enquanto o DNA nas células procariontes é localizado no

citoplasma.

Algumas diferenças:

Procarioto: Tem funcionamento simples, não há organelas membranosas, material genético está no citoplasma., a molécula de DNA circular, se reproduzem por fissão binária assexuada, constituem seres unicelulares e são seres procariontes que fazem parte do reino monera, bactérias e arqueias.

Eucarioto: Tem funcionamento complexo, possui organelas membranosas, material genético está dentro do núcleo, tem molécula de DNA longa e filamentar, se reproduzem por mitose e meiose, formam seres uni ou pluricelulares, são seres eucariontes reinos protista, fungi, plantae e animalia, fungos, plantas e animais.

• Biossegurança:

1. Quais as principais medidas de biossegurança a serem adotadas em um laboratório de Biologia Molecular?

Resposta: As principais medidas de biossegurança em laboratórios de Biologia

Molecular incluem o uso de Equipamento de Proteção Individual (EPI), separação de espaços para diferentes etapas do processo, adoção de técnicas assépticas e práticas de manipulação adequadas, controle de acesso restrito, gerenciamento adequado de

resíduos, manutenção e calibração de equipamentos, treinamento contínuo para a

equipe, planos de emergência, monitoramento e auditorias regulares. Essas medidas visam garantir a segurança dos pesquisadores, a integridade dos experimentos e a prevenção de contaminações.

1. Quais as principais fases da extração de DNA?

Resposta: As principais fases da extração de DNA incluem a lise celular, precipitação de proteínas e lipídios, precipitação do DNA, lavagem do DNA precipitado, e ressuspensão do DNA. Essas etapas visam separar o DNA de outros componentes

celulares, garantindo sua pureza e qualidade para aplicações subsequentes. O processo pode variar dependendo do método específico de extração utilizado.

• Pipetagem:

Aula Prática - Questões:

1. Qual é a importância do conhecimento das vidrarias para o trabalho em laboratório? Resposta:O trabalho em um laboratório requer muito cuidado e atenção, essas vidrarias são essenciais para a realização de procedimentos químicos, pois permitem que os cientistas manipulem substâncias de maneira segura e precisa. Saber manipular corretamente as vidrarias, reduz o risco de acidentes, pois muitas vidrarias são frágeis e podem quebrar facilmente, o que pode resultar em ferimentos se não forem manuseadas

adequadamente.Alguns experimentos requerem medidas precisas para conhecer as diferentes vidrarias e suas capacidades ajuda os profissionais a selecionar o equipamento apropriado e garantir a precisão nas medições. O conhecimento das vidrarias permite que os profissionais de laboratório trabalhem de maneira mais eficiente. Eles podem escolher as vidrarias mais

apropriadas para as tarefas específicas, economizando tempo e recursos.

1. Existe diferença entre pipetagem com as pipetas graduadas e as micropipetas?

Resposta: Sim, a vantagem da micropipeta digital é evitar o efeito “paralaxe”, que ocorre quando o ajuste da pipeta não é feito segundo as boas práticas de pipetagem, são essenciais para trabalhos que demandam alta precisão em volumes muito pequenos, enquanto pipetas graduadas mede volumes variáveis, são menos precisas e usadas quando a precisão não é relevante.

• Fases de extração do DNA genômico: Materiais:

• 1 becker 200 ml
• 2 becker 500 ml
• 1 prato
• 1 funil
• Gaze
• Garfo, faca e colher
• Ralador
• Recipiente para banho – maria gelado
• Água quente a 60° C
• Sal
• Detergente liquido
• Álcool gelado
• Gelo
• 1 cebola

Procedimento:

1. Enquanto a água aquecia, foi preparado o tampão de extração em um dos beckers de 500ml, misturando:

• 2 colheres de sal;
• 3 colheres de detergente;
• 200ml de água quente;

1. Depois a cebola foi descascada e ralada;
2. Foi misturada bem a cebola com o tampão de extração do becker e foi necessária a espera de 10 a 15 minutos;
3. Após espera a mistura foi resfriada em banho-maria gelado;
4. A mistura após resfriada foi transferida para outro becker de 500 ml usando a gaze como filtro;
5. O álcool gelado foi adicionado vagarosamente pelas bordas do becker até formar uma camada de 2 cm sobre a mistura filtrada;
6. Após alguns instantes foi possível observar o DNA junto com algumas bolhas;

• Função do fenol/clorofórmio na extração de DNA de bactérias:

O fenol/clorofórmio é utilizado na extração de DNA de bactérias para remover proteínas, inibir enzimas que podem degradar o DNA e facilitar a separação das fases aquosa e orgânica. O fenol desnatura proteínas, o clorofórmio auxilia na separação de fases, e a