A Biologia Molecular e Biotecnologia

Unigran Capital Curso: Biomedicina

Disciplina: Biologia Molecular e Biotecnologia 2016-2

Prof. Dr. Renata Matuo

Lista de exercícios 1 para P2 Regulação da Expressão gênica

1. Explique por que a regulação da expressão gênica é de suma importância para os organismos.

Pois a regulação gênica dá à célula o controle sobre a sua estrutura e função, e é a base da diferenciação celular, da morfogênese e da versatilidade e adaptabilidade de qualquer organismo. 

1. Explique o funcionamento do óperon lac em procariotos (quantos genes estão presentes, quando os genes são expressos e quando são reprimidos).

O óperon lac é um tipo de organização formada por diferentes genes que atuam em uma mesma via metabólica.

Nos organismos procariotos consiste em 3 genes estruturais, 1 promotor, 1 terminador, 1 regulador e 1 operador.

Os 3 genes estruturais são lac Z ( gene da B- Galactosidase), lac Y ( gene da permease) e lac A ( gene da transacetilase)

1. A expressão gênica pode ser regulada em diferentes etapas. O esquema a seguir mostra os diferentes níveis de regulação, enumerados de 1 a 5. Identifique estes 5 níveis.

[pic 1]

1 - Transcrição   2 – Processamento RNA 3 -  Transporte até o citoplasma 4 – Tradução 5 – Ativação da proteína

1. Em eucariotos, o controle da expressão gênica pode ocorrer no nível espacial ou temporal. Explique o que é o controle espacial e o que é o controle temporal

Controle espacial: No inicio todas as células são iguais , e em um determinado momento um célula se especializa, ou seja, decide qual conjunto de genes poderá nela ser expresso e desliga permanentemente os demais.

Controle temporal: Assim como diferentes genes são acionados em localidades diferentes no embrião, outros acionadas em tempos diferentes do desenvolvimento

Citoquímica e Histoquímica

1. Sobre os métodos de citoquímica e histoquímica, responda:

1. Para que servem estes métodos?

Citoquímica: são utilizados na investigação de diversas patologias, particularmente as hematológicas.

Histoquímica: colorações em tecidos para investigação de patologias ( tumores)

1. Qual a diferença entre estes métodos?

Citoquímica – para sangue

Histoquímica – para amostra de tecidos

1. A imunohistoquímica é uma importante ferramenta no tratamento do câncer. Cite 3 aplicações nas quais a identificação de diferentes biomarcadores podem contribuir.

No diagnostico – benigno e maligno

No prognóstico e escolha dos tratamentos

Na recorrência do câncer

Cromatografia

1. O que é cromatografia?

Método físico-químico de separação , miugração diferencial dos componentes de uma mistura que ocorre devido a diferentes interações, entre duas fases imiscíveis e fase móvel e a fase estacionária.

1. Cite duas aplicações da cromatografia.

Cromatografia em papel: utilizado para separação de compostos polares (bioquímica).

Cromatografia líquida: isolamento de produtos naturais e purificaçãp de produtos de reações químicos.

---

Extração de DNA e quantificação

1. Os protocolos de extração de ácidos nucléicos baseiam-se em 3 etapas principais. Quais são elas? Para que serve cada etapa?

1. lipe das células: extração , quebra cellular
2. Purificação da amostra: lavagem da amostra
3. Precipitação dos ácidos nucléicos: agregados que pode ser coletados por centrifugação

1. Após realizar uma extração de DNA, como você faria para quantificar o DNA da amostra?

A quantificação das células de DNA pode ser realizada por meio de espectrofotometria e fluorescência em gel.

Eletroforese em gel

1. Sobre o método de eletroforese e gel, responda:

1. Para que é utilizada esta técnica?

Separar fragmentos de DNA, RNA e proteínas

1. No que se baseia a técnica?

O DNA e o RNA possuem carga negativa -> migram em direção ao pólo positivo

1. Quando deve-se usar o gel de agarose ou de poliacrilamida?

O gel de agarose separa fragmentos que varia de 0,2kb a 50kb ( 1kb = 1000 pares de bases).

O gel de poliacrilamida separa fragmentos pequenos de até 1kb

Reação em cadeia da polimerase

1. Qual o princípio da reação em cadeia da polimerase?

Permite que uma seqüência de DNA ou RNA seja amplificado in vitro, produzindo bilhões de copias das seqüências desejadas em poucas horas.

1. Quais os componentes necessários para uma reação de PCR?

DNA polimerase, desoxirribonucleotídeos trifosfatados ( A,T,G e C); par de primers, alguns sais; DNA molde.

1. As reações de PCR ocorrem em ciclos repetidos de desnaturação, anelamento e extensão.

1. Explique o que ocorre em cada etapa.

Desnaturação – para ocorrer a amplificação do DNA, ele deve ser desnaturado. A abertura da fita ocorre em torno de 50 a 100ºc em que as pontes de hidrogênio são rompidas.

Anelamento dos primers: Em seguida a temperatura é reduzida para 45 a 65ºc para ocorrer o anelamento dos primers.