A Determinação da atividade enzimática
Por: Pamela Mazo • 18/5/2018 • Relatório de pesquisa • 506 Palavras (3 Páginas) • 574 Visualizações
UNIVERSIDADE TECNOLÓGICA FEDERAL DO PARANÁ
CAMPUS FRANCISCO BELTRÃO
BIOQUÍMICA
Prática – Determinação da atividade enzimática
Solução da enzima: coletar em copo plástico 2mL de saliva.
Solução A = preparar solução da enzima coletando saliva do copo descartável para um tubo de ensaio e depois diluir 1:10 (Pegar 1mL da saliva e completar o volume com 9 mL com a solução NaCl 0,9%)
Solução B = 1:50 (Pegar 0,1mL da solução da enzima e completar o volume com 4,9 mL com solução de NaCl 0,9%).
1- Efeito do tratamento térmico na atividade enzimática
Identifique 3 tubos de ensaio para os testes (T1, T2 e T3).
- T1- Adicione 1mL da solução de saliva diluída (A). Ferver em banho Maria (100º.C) por 15 minutos.
- T2 - Adicione 1mL da solução de saliva diluída (B). Ferver em banho Maria (100ºC) por 15 minutos.
- T3 – Adicione 1mL de água destilada. Ferver em banho Maria (100º.C) por 15 minutos. (branco)
2- Concentração da enzima
- Prepare uma bateria de 5 tubos/amostras (A1, A2, A3, A4, A5) e coloque em cada um deles 1mL de solução NaCl 0,9%.
- Coloque 1mL de solução de saliva diluída (B) no primeiro tubo, misture bem e retire 1ml da mistura feita neste tubo e transfira para o segundo tubo, procedendo da mesma forma. Repita a operação nos tubos restantes da série. Retire 1ml da mistura do último tubo e despreze.
- Identifique mais um tubo (AB - branco) e adicione 1mL de H2O destilada e 1mL de solução de NaCl 0,9%.
3 – Efeito do pH na atividade enzimática
Identifique 3 tubos de ensaio para o teste (B1, B2 E B3)
- B1- Pegar 0,1 mL da saliva e 9,9 mL de HCl 0,1M
- B2 - Pegar 0,1 mL da saliva diluída (A) e 0,9 mL de HCl 0,1M
- B3 - Pegar 0,1 ml da saliva diluída (B) e 0,9 mL de HCl 0,1M
- BB - Pegar 0,1ml de água destilada e 0,9 mL de HCl 0,1M (branco)
Nos tubos dos testes T1, T2, T3, A1, A2, A3, A4, A5, Ab, B1, B2, B3, BB
- Adicione a cada tubo, 1mL da solução de amido 5 %. Misture.
- Observe e anote as características das soluções.
- Coloque os tubos em banho Maria a 37ºC por 30 minutos e resfrie em água gelada, para interromper o processo enzimático.
Revelar o resultado adicionando a cada tubo 2 gotas da solução de Lugol e misture.
O teste é considerado positivo para o amido quando apresenta cor azul intensa.
Prática 2 – Atividade enzimática
- As enzimas são catalisadores biológicos, explique como as enzimas aceleram a reação em termos de: energia de ativação, ligação com substrato, e Km.
- Qual a enzima e qual substrato foram utilizados para esta prática?
- Qual é a reação catalisada pela enzima
- Que tipo de produto é formado pela reação enzimática?
- Preencha os resultados encontrados na prática:
Tubo | Característica apresentada (cor/ tonalidade) |
T1 | Preto |
T2 | Marrom |
T3 | Roxo escuro |
A1 | Cinza |
A2 | Chumbo |
A3 | Preto |
A4 | Preto |
A5 | Verde Musgo |
Ab | Marrom |
B1 | Lilás |
B2 | Roxo Vinho |
B3 | Chumbo |
Bb | Roxo escuro |
...