Biologia molecular

UNIVERSIDADE CATÓLICA DOM BOSCO – UCDB

CURSO DE MEDICINA VETERINÁRIA

KHRISLEY VELASQUE BITENCOURT

MARIANA DA CUNHA CARBUNCK

RELATÓRIOS DE BIOLOGIA MOLECULAR

CAMPO GRANDE – MS

2016

KHRISLEY VELASQUE BITENCOURT

MARIANA DA CUNHA CARBUNCK

RELATÓRIOS DE BIOLOGIA MOLECULAR

[pic 1]

CAMPO GRANDE – MS

2016

RELATÓRIO 1

 

INTRODUÇÃO

Separação do DNA

Fizemos na aula prática de biologia molecular passo a passo como fazer a extração do DNA de animais, passando por várias etapas uma á uma, usando materiais laboratoriais como pipetas, tubos, espectrofotômetro, banho Maria, homogeneizador, e tubos que foram colhidos sangue de animais entre eles cães e até mesmo serpente.

Com o objetivo de fazer a extração do DNA e ver se o resultado foi contaminado ou não, dependendo dos valores que o espectrofotômetro apresentar.

 

Extração do DNA

Para que possamos obter os certos resultados da amostra, passamos por varias etapas que citarei abaixo.

1º PASSO:

Preparo da amostra,  líquido ou sólido, mudando de acordo com a natureza da amostra.

2º PASSO:

Rompimento da membrana, usando proteinase K, SDS, e calor para que a membrana seja lizada e expondo o DNA.

Pipetar 250 microlitros de sangue e passar para o tubo heparina lesiona a hemoglobina EDTA ou CITRATO mais utilizado.

Adicionar 25 microlitros de proteinase K e homogeneizar a amostra, logo em seguida ir para o banho Maria durante 1 hora a 65 graus.

Acrescentar sulfato de sódio após banho Maria com 250 microlitros para solubilizar os lipídeos e lesionar a membrana para que o DNA vá para fora e impedem que os nucleasses degradem o DNA. Logo em seguida homogeneizar a amostra no vortex e a 65 C no banho Maria novamente por 1 hora.

3º PASSO:

Guarnição: proteção do DNA. 2 reagentes clorofórmio ou EDTA e solução de precipitação proteica, que tem a função da desnaturação da proteína e separação do DNA.

Solução de precipitação proteica: 2 reagentes : Ácido acético glacial e Acetato de potássio. 800 microlitros de cloroforme depois levar ao vórtex. 400 microlitros de solução de precipitação proteica, fazer a centrifugação para que a proteína fique de um lado e o DNA de outro, levar a centrifugação por 10 minutos em rotação máxima de 1000 rotações por minuto.

Formação de 3 fases

1  Aquosa ; DNA  o que é utilizado

2  Fase das proteínas e restos celulares

3  Fase dos resíduos da solução

1000 microlitros da parte transparente;

Adicionar álcool 1 ml  etílico PA;

Centrifugar por 10 minutos: nuvem vai para o fundo do tubo e se adere;

Retirar e despregar o sobrenadante e adicionar 1 ml de etanol 70% gelado  e mais 10 minutos de centrifuga; ativa e despreza o sobrenadante . Logo em seguida centrifuga novamente por 10 minutos , e despreza o sobrenadante.

RELATÓRIO 2

Verificação de pureza e quantificação do DNA

Os ácidos nucléicos absorvem luz a 260 ηm. Sabendo-se que, com o valor da absorbância a 260 ηm (A260) sendo igual a 1, a concentração de DNA fita dupla corresponde a 50 μg/mL. Dessa forma, a concentração de DNA pode ser obtida por meio da fórmula: