Determinação de Açúcares Redutores Pelo Método do Ácido

[pic 1]UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE

ESCOLA DE QUÍMICA E ALIMENTOS – EQA

CURSO DE ENGENHARIA BIOQUÍMICA

DISCIPLINA DE BIOQUÍMICA I

Determinação de açúcares redutores pelo método do ácido 3,5- dinitrossalicílico

Larissa Soria de Souza (129417)

Rio Grande, 2021

1. INTRODUÇÃO

        Açúcares redutores são carboidratos que possuem seu grupo carbonílico livre, capazes de se oxidar na presença de agentes oxidantes em solução alcalina. Essa oxidação ocorre apenas com o monossacarídeo em sua forma linear  que está em equilíbrio com sua estrutura cíclica. Assim, o carbono carbonílico, denominado anomérico quando na estrutura cíclica, é oxidado a um grupo carboxílico. Por outro lado, os carboidratos cujos carbonos anoméricos estão envolvidos em ligações glicosídicas, sendo incapazes de assumirem a sua forma linear e, portanto, de se oxidarem em solução alcalina, são denominados açúcares não redutores, como exemplo, a sacarose (SILVA et al., 2003; NELSON; COX, 2014).

      O  método  DNS  utiliza  a  característica  redutora  de  açúcares  para  sua quantificação. O princípio vem através de  uma  molécula chamada Ácido 3,5 -dinitro salicílico  (DNS)  que quando puro apresenta  uma  coloração  alaranjada,  este  ácido é facilmente  reduzido  por  açúcares,  embora  possa  apresentar  menor  eficiência  se  a solução utilizada possuir outras espécies redutoras fortes. Quando reduzido, o DNS se torna ácido 3-amino-5-nitro salicílico, e passa a apresentar-se com uma  coloração acastanhada, composto com máxima absorbância de luz em 540 nm. Através  dessa  mudança  de  coloração  é  possível  construir  roteiros  de  ensaios colorimétricos  e  medir  a  quantidade  de  açúcares  relacionando  a  quantidade  de  DNS reduzido. Todavia, um dos principais substratos para a  fermentação  de  microorganismos  é  a  sacarose,  que  não  possui  poder  redutor,  é necessário  neste  caso, a  hidrólise  ácida  desses  açúcares  em  glicose  e  frutose,  para apenas depois disto proceder como uma análise pelo método DNS comum (HARRIS; 2015). A espectrofotometria UV-VIS é um método de análise analítico que estuda a interação entre diferentes tipos de radiação com a matéria. Essa técnica nos permite medir a absorção molecular nas regiões ultravioleta e visível para determinar a concentração dos compostos em solução através da transmitância.

1. OBJETIVOS

         O experimento tem por objetivo, traçar uma curva padrão para a dosagem de glicose pelo método do Ácido 3,5 – dinitro salicílico (DNS) e a partir dessa curva, determinar a concentração de uma solução, obtendo a leitura da transmitância em espectrofotômetro à 546 nm. Dessa forma iremos obter os resultados que precisamos, para concluir o experimento.

1. MATERIAL E MÉTODOS

 

1. Material

      Foram utilizados os seguintes materiais: béquer de 200mL, tubos de ensaio com rosca, pipetas graduadas, banho termostatizado e espectrofotômetro.

1. Reagentes e soluções

       Foram utilizados: solução estoque 1 mg/mL de glicose (para preparo das diferentes concentrações), soluções de diferentes carboidratos, solução aquosa de hidróxido de sódio (NaOH), água destilada (H2O), solução de tartarato de sódio e potássio (KnaC4H4O6.4H2O), água (H2O), fenol (C6H6O) e Reagente 3,5 dinitrossalicílico (DNS).  

1. Procedimento experimental

       Primeiro separamos os tubos de ensaio, e identificamos com números e solução.

No tubo da solução branco colocamos 1mL de água destilada.

Nos tubos de 1 a 5, deve ser colocado quantidades crescentes de glicose, então no tubo 1 deve ser colocado 0,2mL, tubo 2 0,4mL, tubo 3 0,6mL, tubo 4  0,8mL e tubo 5 1mL

No tubo da solução problema deve ser colocado 1mL da solução que queremos descobrir a concentração.

Os tubos de 1 a 5 deve ser completado com água até o volume de 1mL

E depois colocar em cada tubo de ensaio colocar 1mL de (DNS).

Depois tranferir todos esses tubos para uma banho de 100°C e aguardar 5min, após o tempo retirar todos os tubos de ensaio.

Depois é preciso diluir todos os tubos com água destilada, adicionando  8mL em cada tubo, para todos terem o mesmo volume.

Agitar cada tubo para homogeneizar as soluções.

Após isso dozar cada uma das cores das soluções do tubo no espectrofotômetro.

Primeiro colocar o tubo com a solução branco e zerar o espectrofotômetro, zerando o aparelho pode retiar e ir para as proximas soluções para obter os valores da absorbância e montar a curva padrão. Os tubos de ensaio devem ser analisados no espectrofotômetro UV-VIS a 546nm.

TABELA 1 – Dados para a construção da curva padrão de glicose

			Tubos
	0	1	2	3	4	5
Solução estoque de glicose (mL)	0	0,2	0,4	0,6	0,8	1,0
H2O (mL)	1,0	0,8	0,6	0,4	0,2	0
3,5-DNS (mL)	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
Banho á 100°C(min)	5	5	5	5	5	5
Esfriar e adicionar H2O (mL)	8,0	8,0	8,0	8,0	8,0	8,0