Resultados e Discussão

Resultados e Discussão

• Cálculo das concentrações de glicose

Utilizando um padrão de glicose com concentração 5mol/mL, temos para o primeiro ponto:

C1 = 0,2 mL. 5,0mol / 1,0mL = 1,0 µmoles/mL

Fazendo para os demais pontos, podemos fazer a seguinte tabela:

Vol. de padrão adicionado (mL) Concentração final (mol/mL)

0 0

0,2 1

0,4 2

0,6 3

0,8 4

1 5

Tabela 1 – Concentrações de glicose nos pontos da curva padrão.

Na tabela 2 tem-se os tubos utilizados para a curva padrão e as respectivas absorbâncias, e no Gráfico 1 podemos ver a linearidade da curva:

Tubo Sol. Glicose Água [Glicose] (mol/mL) Absorbância

Branco 0 1,0 - -

1 0,2 0,8 1,0 0,090

2 0,4 0,6 2,0 0,188

3 0,6 0,4 3,0 0,287

4 0,8 0,2 4,0 0,384

5 1,0 0 5,0 0,479

Tabela 2 - Resultados para a curva padrão.

Gráfico 1 - Curva Padrão da Glicose.

• Concentrações dos produtos formados

A partir do gráfico acima temos: y = 0,0965x - 0,0031. Resolvendo pra x para todos os tempos medidos:

 Tubo t =1 min

X= 0,125mol/mL

 Tubo t = 2 min

X= 0,550mol/mL

 Tubo t = 3 min

X= 0,944mol/mL

 Tubo t = 5 min

X=1,431mol/mL

 Tubo t = 10 min

X=2,913mol/mL

 Tubo t = 15 min

X=4,198mol/mL

Esses resultados nos permitiram montar a Tabela 2:

Tempo (min) Conc. de produto formado (μmol/mL) Absorvâncias

0 0 0

1 0,125 0,009

2 0,550 0,050

3 0,944 0,088

5 1,431 0,135

10 2,913 0,278

15 4,198 0,402

Tabela 2 - Concentração de produto formado (μmol/mL) em função do tempo de reação e suas respectivas absorbâncias.

Por meio dos resultados organizados na Tabela 2, pudemos construir o Gráfico 2:

Gráfico 2 -Produto formado x tempo

O gráfico assumiui um aspecto linear altamente linear, mesmo forçando com que a linha de tendência passasse pelo ponto 0, como mostra o R². Isso indica que a reação não chegou ao seu equilíbrio (nem mesmo parece ter chegado a se aproximar dele). A Figura 1 mostra o aspecto esperado da evolução da concentração de produtos em função do tempo para uma enzima que segue a cinética de Michaelis-Menten.

Figura 1 – Gráfico típico da cinética enzimática de Michaelis Menten.

Percebe-se que os pontos obtidos estão localizados na região linear do gráfico de Michaelis Menten.

- Cálculo da velocidade inicial da reação:

Ponto escolhido: entre 0 e 15 min

v= ΔP / Δt

v = 4,198 / 15

v= 0,280 μmol/mL.min

Mas como o preparado enzimático for a diluído 500 vezes, temos que:

Vreal=0,280*500=