Aulas de laboratório

Aulas de laboratório

- Teste da oxidase                              bactérias Gram negativo (as bactérias gram positivo não reagem, as gram positivo reagem e deixam uma mancha rosa no papel que contém o reagente). As bactérias gram negativo têm capacidade oxidação-redução semelhantes ao do reagente.[pic 1]

Pesquisa da Oxidase: utiliza-se para diferenciar o género Neisseria (oxidase positiva) de outros cocos gram negativos e para distinguir a família Enterobacteriaceae (oxidase negativa), de outros bacilos gram negativos (oxidase positiva).

[pic 2]

-Teste da catalase (com H2O2)                          destinguir bactérias cocos[pic 3]

Indicador Azul de bromotimol – em meio ácido é amarelo e em meio básico é azul/verde. Este indicador é usado nos meios de cultura.

Pesquisa da Catalase: é indispensável na identificação de cocos gram positivos. Os estafilococos são catalase positivos, enquanto que os estreptococos são catalase negativos.

[pic 4]

	Amilase	Lipase	DNASE	Fosfatase	Caseína
Pseudomonas	-	-	-	-	+
Bacillus	+	-	-	-	-
Staphylococcus aureus	-	-	+	+	-
Staphylococcus epidermis	-	-	-	+	-
Serratia	-	+	+	+	+
E. coli	-	-	-	-	-

Num meio com amido (teste da amilase) são semeadas diferentes bactérias, aquelas que tiverem a capacidade de produzir amilase vão degradar este composto e apresentam uma auréola transparente à volta (meio de cultura com amido é muito turvo.) Em meio de cultura não corado, não é visível, deve-se cobrir a placa com HCL 1N. A reação positiva apresenta um halo transparente em redor do inóculo, enquanto que o restante fica leitoso.

[pic 5]

Teste da lipase, coloca-se a caixa de petri contra uma fonte de luz. O meio contem Tween 80 e a hidrolise deste causada pela existência de lipase produzida pelas bactérias leva à existência de um precipitado à volta da cultura. Teste positivo – observa-se uma zona de precipitação em redor do inóculo.

[pic 6]

Teste da DNase para determinar a capacidade das bactérias produzirem a enzima DNase, que é capaz de degradar o DNA.Existem dois métodos:

• Este meio contém um meio metacromático denominado azul de Toluidina (TBO). Quando o DNA é hidrolisado, o TBO é complexado, resultado numa coloração rosa em redor do inóculo (reação positiva).
• Nos meios que não contém corante deve-se cobrir a placa com HCL 1N. A reação positiva apresenta um halo transparente em redor do inóculo, enquanto que o restante fica leitoso.

[pic 7]

Teste da fosfatase, observando a cultura não conseguimos diferenças significativas. Por isso tem de se colocar dentro da caixa de petri um pedaço de papel de filtro empragnado com um reagente que não me lembro o nome(acho que contém partículas de prata)… As que apresentam a capacidade de produzir fosfatases ficam com uma turvação rosa à volta da colónia.

[pic 8]

Na cultura com caseína, as bactérias bactérias que produzem enzimas que degradam esta proteína, apresentam um halo à volta do inóculo.

[pic 9]

Os testes da Caseína, DNase e da Lipase são directos, basta olhar para a cultura e facilmente são identificadas as culturas que produzem reação positiva ou negativa.

Os testes da Amilase e da Fosfatase são indirectos, porque temos de adicionar reagentes para que ocorra reacção.

-Testes da degração da glucose em meio aeróbio e anaérobio

• Testes dos tubos glucose e peptonas  ( um em condições de aerobiose e outros em condições de anerobiose (uma camada de glicerina por cima do meio semeado)) usa-se o indicador de bromotimol no meio para detectar .
• As bactérias que usam a glucose e as peptonas dão origem a produtos básicos (a degradação das peptonas ocorre em aerobiose).
• As bactérias que  no tubo de ensaio da glucose só apresentem turvação à superfície são aeróbias e apenas apresentam a via oxidativa.

[pic 10]                   [pic 11]

- Nitrato com Durhan:

• Pode-se observar a produção ou não de gás no interior do tubo de Durhan invertido.
• Testes dos Nitratos (um tubo com nitratos e sem nitratos). Para saber se houve redução de nitratos a nitritos observa-se a turvação do meio.
• As bactérias desnitrificantes são aquelas que possuem a capacidade de reduzir nitratos a azoto livre. (ex: Pseudomonas).

[pic 12]   [pic 13]

Nestes testes podemos prever a motilidade das bactérias.

[pic 14]

Serratia:

Usa a glucose e as peptonas em aeroniose usando a via oxidativa e fermentativa. Só em anerobiose é que usa a via fermentativa da glucose.

E. coli:

Liberta ácido fórmico, CO2 e O2 no meio sem nitratos por isso há rebentamento da gelose no tubo com meio sem nitratos.

No tubo com nitratos a reacção acaba no ácido fórmico. Os nitratos são transformados em nitritos.

Estes testes fazem-se para destinguir as enterobactérias.