A Biologia Molecular

O ácido dioxirribonucleico conhecido popularmente como DNA é uma molécula importante para o

funcionamento de um organismo, por exemplo, nos mamíferos a mesma é responsável por fornecer

instruções para organismo. Ademais, a mesma é importante para a ciência de modo geral, principalmente

para estudos moleculares, a qual vem se aperfeiçoando devido a essa molécula, como sabemos o DNA foi

descoberto em meados de 1869, pelo bioquímico suíço Johann Friedrich Miescher, em seguida, a sua

estrutura foi descoberta mais tarde pela cientista Rosalind Franklin que desempenhou um papel

revolucionário para o desenvolvimento de técnicas moleculares.

A priori, essa descoberta promoveu um entendimento filogenético, a qual fornece descobertas evolutivas

avançada. Em vista, todo esse processo foi dado não apenas pela descoberta dessa molécula, mas também a

sua extração que adicionada em um banco de genes, visando que todo cientista com um computador e

conexão a internet podem ter acesso a esse banco. Assim, podendo analisar sequencias e comparar genes

para uso em pesquisas. Em virtude, todo esse conhecimento é utilizado para o desenvolvimento de novas

tecnologias como de medicamentos, vacinas e entre outros. Atualmente existem diversos protocolos padrões

para a extração de DNA como o uso de kits comerciais que são bastante usados, entretanto, é válido

ressaltar que esses kits não apresentam eficiência e seu custo beneficio é alto.

Dessa forma, no relatório produzido será usado um protocolo padrão de extração de DNA de uma mosca

da espécie Drosophila melanogaster, o vídeo escolhido foi realizado pela Professora Maria Cristina Ariais

da Universidade de São Paulo- USP, exibido no portal de vídeo aulas da universidade.

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO-UFRJ

MATERIAS E MÉTODOS

10 adultos de Drosophila melanogaster

Tampão TMD

Micropipetador

Bastão de plástico

Detergente SDS

Proteinase K

incubadora

Luva

Centrifugadora

Fenol

Clorofórmio

Álcool isamílico

microtubos

Etanol 100%

Etanol 70%

Tampão TE

ponteira

Matérias e Métodos

Os materiais utilizados:

A extração do ácido desoxirribonucleico (DNA) das moscas, Drosophila melanogaster, a princípio a

extração de ácidos ribonucleicos envolve três etapas principais, sendo a primeira a Lise, processo promove o

rompimento dos tecidos, a segunda etapa é a limpeza, reagentes químicos são usados juntamente com a

centrifugadora, e a última etapa é a precipitação do DNA, acontece a retirada da molécula.

O primeiro processo seguido em um laboratório é uso de luvas (ARAUJO,2004), em seguida, foi iniciado

o procedimento de extração, logo, a ministrante do vídeo depositou dez Drosophila melanogaster congeladas

em um microtúbulo, em seguida, foi adicionado com ajuda de um micropipetador (300 μl) um tampão de

maceração (TMD), é válido mencionar que o tampão tem como objetivo preservar a integridade do DNA.

Logo após esse processo é necessário fazer a quebra do citoesqueleto da mosca para que ocorra a liberação

dos tecidos para a área externa, sendo assim, foi usado um bastão para essa técnica que começou a macerar a

mosca com esse bastão.

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO-UFRJ

MATERIAS E MÉTODOS

Posteriormente, o segundo passo foi introduzido 12 μl de um detergente SDS nos macerados da

Drosophila, resultando na primeira etapa da Lise. Depois que ocorre a quebra das membranas é acrescentado

uma enzima chamada proteinase K ( 1,5 μl), a qual objetivo é a quebra das histonas, após esse processo, o

microtúbulo foi adicionado em uma incubadora a 65° por 20 minutos. Seguindo