A Determinação da atividade enzimática

UNIVERSIDADE TECNOLÓGICA FEDERAL DO PARANÁ

CAMPUS FRANCISCO BELTRÃO

BIOQUÍMICA

Prática – Determinação da atividade enzimática

Solução da enzima: coletar em copo plástico 2mL de saliva.

Solução A = preparar solução da enzima coletando saliva do copo descartável para um tubo de ensaio e depois diluir 1:10 (Pegar 1mL da saliva e completar o volume com 9 mL com a solução NaCl 0,9%)

Solução B = 1:50 (Pegar 0,1mL da solução da enzima e completar o volume com 4,9 mL com solução de NaCl 0,9%).

1-  Efeito do tratamento térmico na atividade enzimática

Identifique 3 tubos de ensaio para os testes (T1, T2 e T3).

• T1- Adicione 1mL da solução de saliva diluída (A). Ferver em banho Maria (100º.C) por 15 minutos.  
• T2 - Adicione 1mL da solução de saliva diluída (B). Ferver em banho Maria (100ºC) por 15 minutos.  
• T3 – Adicione 1mL de água destilada. Ferver em banho Maria (100º.C) por 15 minutos. (branco)

2- Concentração da enzima

• Prepare uma bateria de 5 tubos/amostras (A1, A2, A3, A4, A5) e coloque em cada um deles 1mL de solução NaCl 0,9%.
• Coloque 1mL de solução de saliva diluída (B) no primeiro tubo, misture bem e retire 1ml da mistura feita neste tubo e transfira para o segundo tubo, procedendo da mesma forma. Repita a operação nos tubos restantes da série. Retire 1ml da mistura do último tubo e despreze.
• Identifique mais um tubo (AB - branco) e adicione 1mL de H2O destilada e 1mL de solução de NaCl 0,9%.

3 – Efeito do pH na atividade enzimática

Identifique 3 tubos de ensaio para o teste (B1, B2 E B3)

• B1- Pegar 0,1 mL da saliva e 9,9 mL de HCl 0,1M
• B2 - Pegar 0,1 mL da saliva diluída (A) e 0,9 mL de HCl 0,1M
• B3 - Pegar 0,1 ml da saliva diluída (B) e 0,9 mL de HCl 0,1M
• BB - Pegar 0,1ml de água destilada e 0,9 mL de HCl 0,1M (branco)

Nos tubos dos testes T1, T2, T3, A1, A2, A3, A4, A5, Ab, B1, B2, B3, BB

• Adicione a cada tubo, 1mL da solução de amido 5 %. Misture.
• Observe e anote as características das soluções.
• Coloque os tubos em banho Maria a 37ºC por 30 minutos e resfrie em água gelada, para interromper o processo enzimático.

Revelar o resultado adicionando a cada tubo 2 gotas da solução de Lugol e misture.

O teste é considerado positivo para o amido quando apresenta cor azul intensa.

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Prática 2 – Atividade enzimática

1. As enzimas são catalisadores biológicos, explique como as enzimas aceleram a reação em termos de: energia de ativação, ligação com substrato, e Km.

1. Qual a enzima e qual substrato foram utilizados para esta prática?

1. Qual é a reação catalisada pela enzima

1. Que tipo de produto é formado pela reação enzimática?

1. Preencha os resultados encontrados na prática:

Tubo	Característica apresentada (cor/ tonalidade)
T1	Preto
T2	Marrom
T3	Roxo escuro
A1	Cinza
A2	Chumbo
A3	Preto
A4	Preto
A5	Verde Musgo
Ab	Marrom
B1	Lilás
B2	Roxo Vinho
B3	Chumbo
Bb	Roxo escuro

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