AD1 Biologia Celular UFRJ CEDERJ

1)

a) O glutaraldeído, quando empregado em concentra- ção e tempo adequados, forma produtos estáveis por ligações específicas entre as proteínas da membrana eritrocitária, com efeitos variáveis sobre as atividades biológicas, como a inibição da hemólise, redução da deformabilidade e manutenção da morfologia (Araki & Rifkind, 1981).

b) e c) Para que as estruturas sejam vistas, a amostra precisa ser marcada com metais pesados tais como sais de urânio e chumbo (Lodish et. al., 2003). Geralmente é obtido um contraste pelo uso de corantes baseados em metais elétron-densos que absorvem ou espalham elétrons, removendo-os do feixe à medida que passam através do espécime.

2) O congelamento lento pode ser considerado o método clássico de criopreservação de embriões. Ele tem a vantagem de utilizar baixas concentrações de crioprotetores, agentes nos quais os embriões são imersos para a criopreservação e que têm a função de diminuir os possíveis danos causados pelo procedimento.

O equipamento necessário para o congelamento lento pode determinar a velocidade de resfriamento, a partir da temperatura ambiente em que se encontram os embriões até a temperatura do nitrogênio líquido (-196ºC) e pausas necessárias como, por exemplo, para a indução da formação de cristais de gelo, que pode ser observada pelo exterior da paillete. Este

processo é chamado de seeding, e é de fundamental importância para o sucesso do congelamento lento. O equipamento é resfriado pelo nitrogênio liquido, o qual é bombeado a partir de um tanque, para o interior de uma câmera onde existem suportes para acomodar as pailletes contendo os embriões.

O número de embriões a serem descongelados em um ciclo de transferência depende do número e da qualidade deles, quando do congelamento. Em geral, descongela-se um embrião por vez acessando-se a cada passo a ausência de lise dos blastômeros e degeneração dos mesmos até a última etapa do processo. Um embrião que sobreviveu bem ao congelamento apresenta pelo menos 50% de seus blastômeros intactos e assim deve-se constituir um grupo de embriões com características de viabilidade morfológicas satisfatórias para transferência imediata ou cultivo pra transferência posterior.

3) As culturas primárias são formadas a partir células que sobrevivem aos processos de desagregação, aderem-se ao substrato da garrafa de cultura (ou mantêm-se em suspensão) e proliferam. Culturas de células primárias são produzidas a partir de células retiradas de um tecido por processos de desagregação por métodos mecânicos, enzimáticos ou químicos.

As células primárias possuem morfologia idêntica ao do tecido das quais se originam. A cultura primária permite pouco número de divisões celulares, após as quais entram em estado de senescência e morrem. Muitos cientistas preferem utilizar culturas primárias em seus experimentos uma vez que estas células mantêm as características fisiológicas do tecido de origem, podendo ser consideradas portanto como representativas das condições naturais de um organismo.

Referências Bibliográficas:

http://www.ufrgs.br/topicosembriao/Criopreserv.html

Araki, K.; Rifkind, J. M.. The rate of osmotic hemolysis. A relationship with membrane bilayer fluidity. Biochim. Biophys. Acta., Amsterdam: v. 645, p. 81 - 90, 1981.

Lodish  H.; Berk A.; Kaiser C. A.; Krieger M.; Bretscher A.; Ploegh H.; Amon A. Biologia Celular e Molecular 7ed. Porto Alegre: Artmed, 2003, 1241p

http://www.laben.ufscar.br/documentos/arquivos/cultura-celular.pdf

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