Análise da expressão do CREB

Analise da expressão do CREB no comportamento animal

1. Introdução.

Montminy & Bilezikjian (1987) descreveram pela primeira vez o CREB como fator de transcrição da somatostatina de resposta a cAMP.

O CREB é uma proteína que atua como fator de descrição. Ele se associa a certas sequências de ADN denominados elementos de respostas a cAmp, aumento ou diminuindo a transcrição que é regulada por esse gene (Purves et al, 2008).

Dentre todos os órgãos que o CREB tem alguma função, o que tem suas funções mais estudadas é o cérebro (Carlezon at al, 2005). Acredita-se que, em neurônio, o CREB está relacionado com a aprendizagem e formação da memória em longo prazo (May & Montmyni, 2001). Ele também desempenha um papel importante no desenvolvimento da dependência de drogas (Wang, 2009).

Segundo Maluf (2011), a aplicação de um nível elevado de cocaína resultara em um aumento no nível do CREB e pCREB, podendo ser uma facilitação do processo de memória e aprendizado.

1. Objetivo

Avaliar a expressão de CREB em tecidos cerebrais de ratos com comportamento de uso de drogas monitorado. Escolheu-se este comportamento como modelo desta padronização, pois este já apresenta uma área cerebral claramente envolvida com a atividade: Amidala.

1. Material e métodos.

Os tecidos para a preparação das proteínas CREB serão obtidos a partir do isolamento da região de interesse a partir do cérebro de ratos albinos (Rattus norvegicus, linhagem Wistar), adultos, com aproximadamente 90 dias de idade. Os animais serão alojados em gaiolas de polipropileno (30X40X18cm), em salas com sistema de ventilação (23±2oC) e ciclo de luz de 12h (06:00-18:00). Água e comida serão oferecidas ad libitum até o período de jejum que não ultrapassará 48 horas. Vale ressaltar que o projeto possui autorização do conselho para a realização destes experimentos com os animais.

A extração do CREB será realizada utilizando-se o Kit Episeeker da ABCAM e a dosagem da concentração total de proteínas pelo método de Bradford.

        O extrato pode ser estocado a -80°C e utilizado em ensaios de eletroforese. Após a eletroforese será procedido o ensaio de Western blotting como descrito em Cabral et al, 2001. Serão estudados, com base na vasta literatura a respeito, os anticorpos primários que poderão ser empregados  para avaliação das modificações do CREB responsáveis pela regulação  gênica.

1. Referências

• Stevens, B., and Fields, R.D. (2000). Response of Schwann cells to action potentials in development. Science 287, 2267–2271.
• Montminy MR and Bilezikjian LM. Binding of a nuclear protein to the cyclic-AMP response element of the somatostatin gene. 1987 Jul 9-15;328(6126):175-8.
• Purves, Dale, George J. Augustine, David Fitzpatrick, William C. Hall, Anthony-Samuel LaMantia, James O. McNamara, e Leonard E. White (2008). Neuroscience. 4ª ed. Sinauer Associates. pp. 170-6.
• Carlezon WA, Duman RS, Nestler EJ. The many faces of CREB. 2005. Trends in Neurosciences 28 (8): 436-45.
• Mayr B, Montminy M. Transcriptional regulation by the phosphorylation-dependent factor CREB. 2001. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2 (8): 599-609.
• Wang Y, Ghezzi A, Yin JC, Atkinson NS. CREB regulation of BK channel gene expression underlies rapid drug tolerance. 2009. Genes, Brain, and Behavior 8 (4): 369-76.
• Maluf, M. Efeitos do tratamento com cocaína sobre parâmetros comportamentais e na expressão de CREB/pCREB e BNDF em camundongos adolescentes e adultos. 2011. 91 pags. Mestrado-USP. São Paulo.
• Cabral, A.L.; Hats, A.N.; Housley, P.R.; Brentani, M.M.; Martins, V.R. Repression of glucocorticoid receptor gene transcription by c-Jun. Mol Cell Endocrinol. 25;175(1-2):67-79, 2001.