Aula Pratica - Meio De Cultura

UNIVERSIDADE PAULISTA - UNIP

MEIO DE CULTURA E SEMEADURA

São Paulo

2013

Bruna

Débora de Albuquerque Oliveira Gil – RA B85044-2

Débora Ramos do Nascimento Sousa – RA B79957-9

Gabriel Almeida – RA B70FHJ-3

MEIO DE CULTURA E SEMEADURA

Prática laboratorial de Microbiologia do Curso de Graduação de Farmácia 2º semestre.

Orientador(a): Profª Flavia de sousa gehrke

São Paulo

2013

Introdução

Os microrganismos eram cultivados em meios líquidos até 1880, quando Robert Koch e sua equipe introduziram os meios de cultura sólidos, os quais permitiram o estudo de espécies isoladas (culturas puras), separando-as de espécies contaminantes.

Meios de cultura consistem da associação qualitativa e quantitativa de substâncias que fornecem os nutrientes necessários ao desenvolvimento (cultivo) de microrganismos fora do seu meio natural. Tendo em vista a ampla diversidade metabólica dos microrganismos, existem vários tipos de meios de cultura para satisfazerem as variadas exigências nutricionais. Além dos nutrientes é preciso fornecer condições ambientais favoráveis ao desenvolvimento dos microrganismos, tais como pH, pressão osmótica, umidade, temperatura, atmosfera (aeróbia, microaeróbia ou anaeróbia), dentre outras.

Desta forma podemos dizer que o meio de cultura é uma substância líquida ou gelificada, simples ou complexa, que permite a nutrição, o crescimento e a multiplicação dos microorganismos.

Com relação à técnica de semeadura, esta consiste em espalhar o material com o auxilio de uma alça bacteriológica, fazendo estrias sucessivas até o esgotamento do material que após a incubação formarão colônias isoladas sobre a superfície do Agar.

Objetivos

Preparar meio de cultura e verificar qual sua aplicação bem como aprender técnicas de semeadura.

Materiais e equipamentos:

 Becker;

 Alça de Platina (bacteriológica);

 Erlenmeyer;

 Placas de Petri;

 Bico de Bunsen;

 Balança de Precisão;

 Autoclave;

 Papel Pardo;

 Barbante;

 Algodão Hidrofóbico;

 Papel alumínio;

 Papel manteiga,

 Fita adesiva indicadora para autoclave.

Reagentes e soluções

 Agar Mac conkey;

 Agar Cled;

 Agar Nutriente;

 Água Destilada.

Procedimentos:

1) Preparo de meios de cultura

 Agar Mac conkey:

Pesar 4 g do meio em papel manteiga, e depois transferir para um erlenmeyer, para assim dissolver o meio em 100 ml de água destilada. Em seguida utilizar um tampão (composto por algodão hidrofóbico, gaze e cordão), para tampar o erlenmeyer, envolver o tampão com papel pardo e passar fita adesiva indicadora para autoclave.

O material deve permanecer na autoclave por 20 minutos a 120ºC, para que se possam eliminar os esporos, tornar o meio estéril.

Utilizado para o isolamento de bacilos Gram negativos.

 Agar Cled:

Pesar 3,6 g do meio em papel manteiga, e depois transferir para um erlenmeyer, para assim dissolver o meio em 100 ml de água destilada. Em seguida utilizar um tampão (composto por algodão hidrofóbico, gaze e cordão), para tampar o erlenmeyer, envolver o tampão com papel pardo e passar fita adesiva indicadora para autoclave.

O material deve permanecer na autoclave por 20 minutos a 120ºC, para que se possam eliminar os esporos, tornar o meio estéril.

Usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras urina.

 Agar Nutriente:

Pesar 2,3 g do meio em papel manteiga, e depois transferir para um erlenmeyer, para assim dissolver o meio em 100 ml de água destilada. Em seguida utilizar um tampão (composto por algodão hidrofóbico, gaze e cordão), para tampar o erlenmeyer, envolver o tampão com papel pardo e passar fita adesiva indicadora para autoclave.

O material deve permanecer na autoclave por 20 minutos a 120ºC, para que se possam eliminar os esporos, tornar o meio estéril.

Utilização geral para cultura de várias espécies de microrganismos bacterianos

Após os meios saírem da autoclave, os mesmos devem ser distribuídos uniformemente em placas de Peri (3 placas para cada meio). Tendo o cuidado de estar na área de segurança do bico