Cromatografia

CROMATOGRAFIA

Introdução:

A cromatografia é uma técnica poderosa de separação de materiais que fornece informações quantitativas e qualitativas. Como exemplos a serem dados, graças a essa técnica, é possível imitar as essências florais com o estabelecimento das identidades e quantidades relativas dos componentes de uma fragrância; comparar amostras de fluidos; detectar drogas; testar a qualidade dos produtos e buscar evidência de vida em Marte.

A Cromatografia em papel é assim chamada porque utiliza para a separação e identificação das substâncias ou componentes da mistura a migração diferencial sobre a superfície de um papel de filtro de qualidade especial (fase estacionária). A fase móvel pode ser um solvente puro ou uma mistura de solventes.

Este método é muito útil para separar substâncias muito polares, como açúcares e aminoácidos. Possui o inconveniente de poder-se cromatografia poucas quantidades de substância de cada vez.

2. OBJETIVO

Identificar aminoácidos de um cromatograma, calculando seu RF.

3. PRÁTICA

3.1. Materiais utilizados

- 1 tudo de ensaio;

- Papel de filtro Boeco n°1, em forma quadrada;

- Tubos capilares;

- Lápis e régua;

- Estufa a 90-100°C

- 1 placa de vidro;

- Becker de 500 ml.

3.2. Reagentes utilizados

- 3 soluções de aminoácidos identificados.

- 1 solução de aminoácido desconhecido.

Solvente: mistura de n-butanol – ácido acético glacial – água (4:1:1)

Revelador: solução de ninhidrina 0,25 N em acetona.

4. PROCEDIMENTO

01. Marcou-se em uma das extremidades do papel de filtro, na distância de 2,0cm da borda

deixando uma margem de 0,5cm de cada um dos lados, evitando-se tocar no mesmo, traçou-se

uma transversal como referência para o ponto de origem. Marcar três pontos sobre essa linha,

eqüidistantes um do outro e numerá-los a lápis.

02. Tocou-se com a ponta do tubo capilar, contendo a solução do aminoácido no meio da linha

de ponto de origem, deixando escoar um pouco da solução, mas evitando que se espalhe por

uma área de raio maior que 5 mm. Secar. Nos números de 1 a 4 aplicar os padrões e no número

6, a mistura de padrões. A amostra desconhecida é aplicada no número 5.

03. Colocou-se 25 ml de solvente de Partridge (n-butanol/ácido acético glacial/água 4:1:1), em

uma cuba de cromatografia e mergulhou-se a ponta do papel em seu interior de modo a evitar