Imunocromatografia

Imunocromatografia

Introdução

Imunocromatografia consiste em um método para realizar teste onde há interação anticorpo-antígeno. Todavia usa-se uma placa de superfície inerte com poços onde serão adsorvidos os antígenos junto com um tampão de carbonato. Após esse procedimento é realizada uma lavagem com PBS e logo em seguida é feito o bloqueio com BSA para que os poços livres sejam ocupados. Novamente é feita a lavagem com PBS para retirar o excesso de corante, a superfície é tratada com solução de anticorpo primário onde existe uma quantidade maior de anticorpo do que a proteína de interesse aonde essa vai se ligar a proteína específica. Novamente a superfície é lavada para reirar os anticorpos primários que não foram incorporados em nenhuma proteína. Por fim adiciona a peroxidase de ligação para a enzima produzir a substância corada e assim podendo ser quantificado e verificado a presença de alguma substância de interesse.

O teste para identificação do hormônio Beta HCG é um exemplo do teste citado acima. A técnica utilizada para realizar, é um processo de capilaridade, onde consiste em adicionar fase líquida em uma fase seca. A fase seca puxará a fase líquida, permitindo que caminhe pelas fases da membrana.

Para realizar o teste utiliza-se uma membrana contendo três fases diferentes:

• Fase Reagente: Composta por Anti beta hcg (que estão livres) e moléculas ouro coloidal. As moléculas de ouro coloidal são usadas para dar cor purpúrea à ligação, facilitando a reação.

• Fase Teste: É composta por anticorpo Anti-beta hcg (imobilizados).

• Fase Controle: É composta por por antígeno Beta hcg fixado na membrana.

• O Hormônio Beta hcg está presente em maiores quantidades durante a gestação, sendo o teste realizado rotineiramente para confirmação de gravidez.

Ao adicionar o soro sobre a fase onde estão os reagentes, estes caminharão até a região teste, se houver quantidades significativas de bhcg no soro do paciente acontecerá uma reação chamada sanduíche, confirmando a presença de beta hcg.

A fase controle é usada para garantir que todos os reagentes e soro passaram pela fase teste e por isso deve ser a última fase.

Objetivo

Detectar antígeno Beta hcg no soro do paciente.

Palavras Chave

Beta Hcg, Fases teste e controle, reagente.

Materiais

• Pipeta de 50 micro litros

• Ponteira

• Estante

• Tubo de ensaio

Reagentes

• Soro sanguíneo

• Fita reagente

Procedimento

Homogeneizar a amostra contendo soro sanguíneo.

Retirar a fita