Normas de biossegurança na área da microbiologia

1-INTRODUÇÃO

Este trabalho apresenta como as normas de biossegurança são importantes em microbiologia, quais materiais foram utilizados e como foram utilizados na coleta do material genético, no esfregaço, na fixação, na estufa, na coloração de Gram, e visualização. Apresenta também, como a técnica de Gram diferencia as bactéria Gram negativas das Gram positivas, e como essa técnica é importante em um diagnóstico clinico.

2-OBJETIVOS

2.1-OBJETIVO GERAL

Coletar material biológico da boca, fazer a coloração de Gram, visualizar e identificar a bactéria por sua forma e coloração Gram.

2.2-OBJETIVO ESPECIFICO

• Conhecer o laboratório de Microbiologia;

• Usar equipamentos de proteção;

• Coletar material biológico, fazer a coloração de Gram, visualizar e emitir o relatório;

3-REFERENCIAL TEÓRICO

3.1-NORMAS DE BIOSSEGURANÇA EM MICROBIOLOGIA

As Normas de Biossegurança apresentadas abaixo são um conjunto de ações voltadas para a prevenção, minimização ou eliminação de riscos inerentes às atividades realizadas no laboratório durante as aulas práticas. Estes riscos podem comprometer a saúde dos alunos, o meio ambiente ou mesmo a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.

No ambiente laboratorial podem ser identificados:

• Riscos Físicos: são representados pelos agentes físicos existentes no laboratório, em particular pela ação do calor uma vez que nas aulas práticas de microbiologia o aluno utiliza a chama do bico de Bunsen e no caso de manuseio incorreto poderão ocorrer queimaduras;

• Riscos Químicos: são representados pelos agentes químicos existentes no laboratório, em particular os reagentes utilizados nas aulas práticas de microbiologia. O manuseio incorreto de corantes e outros reagentes químicos representa risco em particular para a pele e a mucosa ocular;

• Riscos Biológicos: são representados pelos agentes biológicos (culturas de bactérias e fungos) utilizadas nas aulas práticas de microbiologia. O manuseio incorreto das culturas representa um risco potencial de contaminação dos alunos, apesar de nas aulas práticas serem utilizados microrganismos de baixíssima capacidade de causar doença.

Cuidados gerais a serem adotados no laboratório de microbiologia:

• Manter as unhas aparadas;

• Manter o cabelo preso para evitar acidentes;

• É recomendado o uso de calça comprida e calçados fechados;

• É indispensável o uso do jaleco;

• Evitar se apoiar, sem necessidade, sobre as bancadas;

• No caso de ferimentos nas mãos não realizar a aula prática (comunicar ao professor);

• Comunicar imediatamente ao responsável qualquer ferimento sofrido dentro do laboratório;

• É obrigatório fazer antissepsia das mãos antes e após as atividades práticas;

• É obrigatório fazer a desinfecção da bancada antes e após as atividades práticas;

• É proibido comer ou beber dentro do laboratório;

• Não tocar a mucosa oral, nasal ou ocular durante as atividades práticas;

• Não pipetar com a boca, utilizando sempre pêra ou dispositivos similares;

• Ao derramar culturas bacterianas cobrir a área com papel toalha e colocar desinfetante (comunicar ao professor);

• Ao derramar líquidos, cuidado com comprometimento da rede elétrica pois existe o risco de choque Elétrico.

3.2-ETAPAS PARA PROCEDIMENTO DA COLORAÇÃO DE GRAM (DA COLETA ATÉ VISUALIZAÇÃO)

Primeiro fizemos a coleta do material genético da boca, fizemos o esfregaço na lâmina e levamos para a caixa para fixar. Depois deixamos na estufa a 36° por três dias e no sétimo dia fizemos a coloração de Gram e visualizamos.

A coloração de Gram é muito importante porque a maioria das bactérias cora-se por este método, permitindo observa sua morfologia e fornecendo informações a respeito do comportamento do material celular diante de corantes básicos (corantes de Gram). Devido a estas vantagens, esta coloração é também utilizada no estudo taxonômico das bactérias.

Técnicas da colorização de Gram:

• Cobrir toda lâmina com solução de cristal violeta, aguardar um minuto e desprezar o corante na pia;

• Cobrir a lâmina com lugol, aguarda um minuto e 30 segundos, e desprezar o corante;

• Inclinar a lâmina e gotejar álcool acetona até que não haja desprendimento de corante (cerca de 30 segundos). Lavar a lâmina rapidamente em água corrente;

• Cobrir com fucsina de Gram e aguarda 30 segundos. Lavar a lâmina e secar (sem esfregar).

3.3-DIFERENÇA ENTRE A PAREDE CELULAR DAS BACTÉRIAS GRAM POSITIVAS E GRAM NEGATIVAS

O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição da parede celular, sendo que as Gram positivas possuem uma espessa camada de peptidoglicano e ácido teicóico, e as Gram negativas, uma fina camada de peptidoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídios, proteínas e lipopolissacarídeos. Durante o processo de coloração, o tratamento com álcool ( ou álcool acetona) extrai os lipídeos, daí resultando uma porosidade ou permeabilidade aumentada da parede celular das bactérias de Gram negativas. Assim, o complexo cristal violeta-iodo (CV-I) pode ser retirado e as bactérias Gram negativas são descoloradas. A parede celular