O Banco de Sangue

Banco de Sangue

Aula 01

Quais são os objetivos? Conhecer os fundamentos da Imunohematologia, explicar o que é hemaglutinação direta e indireta, definir o que são anticorpos aglutinantes e não aglutinantes, definir os antígenos do sistema ABO e do sistema Rh. A imunohematologia é o estudo dos antígenos presentes nas hemácias, leucócitos e secreções corporais (lágrimas e suor), dos anticorpos correspondentes e seus significados clínicos. É uma ciência associada à hemoterapia, banco de sangue, medicina transfusional e doenças relacionadas. Vamos reconhecer que os antígenos podem ser expressos em outras células ou solúveis em fluidos corporais.

Antígenos eritrocitários: 350 identificados (abundantes por estarem presentes nas hemácias), cerca de 36 sistemas de grupos sanguíneos descritos, a sua importância clínica é para o estudo das funções fisiológicas (grupo sanguíneo tem função), das reações pós transfusionais e da relação com as doenças, e os grupos mais importantes são ABO e Rh.

O interesse pela imunohemato veio da necessidade de se investigar as reações imunológicas in vitro, começaram as transfusões e começaram a notar as dificuldades e erros o que trouxe a necessidade dos estudos. Acreditava-se que o sangue de todos era igual. Métodos aplicados ao diagnóstico: precipitação, aglutinação, fixação de complemento, imuno ensaio enzimático e radioimunoensaio.

Aglutinação é um método complexo, as interações que acontecem pra se chegar nesse resultado são complexos.

Hemaglutinação caracteriza-se pela formação de agregados visíveis como resultado da interação antig-antic. Para a gente chegar a hemaglutinação envolve várias coisas, ela pode ser específica, inespecífica (anticorpos podem não estar envolvidos), potencial zeta, métodos direto e indireto. Quando enxergamos agregados visíveis nós temos uma aglutinação positiva. Pra que isso aconteça eu dependo do potencial zeta e de qual método foi empregado.

Potencial Zeta: Diferença de potencial elétrico entre as cargas negativas das membranas dessas hemácias e a nuvem de cátions que essas membranas estão inseridas. Como assim? Devido ao ácido siálico, que está desprotonado em meio salino em que as hemácias estão inseridas e o pH sanguíneo, nós temos que a membrana da hemácia é negativa. Apenas a carga negativa seria teoricamente suficiente para explicar a repulsão entre as hemácias (fato que justifica a hemosedimentação). A nuvem de cátions promove a DDP, diferença de carga entre as cargas negativas e as positivas do sódio do meio salino. Não tem número fixo de cargas em cada hemácia e por isso nós temos a DDP. Além disso ainda tenho o cloreto solvatando e o sódio ao redor de cada hemácia. Nuvem que começa da membrana e se dispersa através do meio. Eu preciso que as forças de coesão estejam maiores que a força de repulsão, ou de repulsão sejam menores que a de coesão, para que ocorra a hemaglutinação. Eu preciso reduzir a nuvem que envolve essas hemácias para que eu consiga que elas se aglutinem. Preciso, por fim, reduzir o potencial zeta misturado com a teoria das pontes.

Teoria das pontes: Ela nos diz que quando tenho anticorpos envolvidos, ele reconhece ao antígeno ancorado nas hemácias e esse mesmo anticorpo tem capacidade de reconhecer outro antígeno que está em outra hemácia, e ai ele faz uma ponte entre as hemácias. Uma molécula de anticorpo é infinitamente menor que a hemácia e por isso preciso pensar que ele sozinho não provoca a aproximação das hemácias.

Método de Aglutinação direta: Quando eu faço uma reação direta entre antig-antic. Nesse caso interessa saber quem é quem para eu entender melhor o método. Nesse a gente procura pelo antígeno, quero saber qual é que está presente na amostra. A amostra do paciente precisa conter esses antígenos, por isso na Hem Direta a amostra é o sangue total, papa de hemácias ou suspensão de hemácias lavadas. Porque aqui a gente trabalha com a teoria de que as hemácias são mais abundantes e consequentemente os antígenos também. Os anticorpos do método direto serão os reagentes de trabalho, soro anti A B C D E. Para fazer a reação da amostra com o reagente posso usar três técnicas, técnica em lâmina (ela vem sendo desencorajada há anos por ser um procedimento aberto e se eu demoro muito para fazer a análise dessa lâmina pode provocar conflitos, risco de contaminação e etc), técnica em tubo ou placa e técnica do gel teste ou gel centrifugação (é considerada a melhor e mais segura, mais confiável do ponto de vista de resultados, mas não é todo laboratório que o tem).

Hemaglutinação direta em tubo: tenho graus diferentes de aglutinação que são visíveis ao olho nu, falo por exemplo 4 cruzes quando eu enxergo um botão sólido e um fundo claro (todas as células estão aprisionadas), 3 cruzes quando vejo grumos grandes e numerosos com fundo claro, 2 quando vejo grumos pequenos e numerosos com fundo róseo e por fim uma cruz quando vejo grumos pequenos e fundo bastante avermelhado. Ela nos dá a ideia de títulos de anticorpos, se eu tenho um antígeno mais imunogênico ou não, a intensidade da reação nos interessa.

Hemaglutinação em placa: para essa reação eu uso placas com fundo em V ou U, que favorecem a formação dos botões. Quando eu tenho fundo avermelhado eu tenho agregados, resultado positivo, portanto.

Hemaglutinação Indireta: Minha pesquisa é por anticorpos, quero saber se na amostra tem o anticorpo de interesse. O reagente, nesse caso, são os antígenos. Preciso de um painel de hemácias conhecidas e previamente classificadas, em relação ao antígeno de interesse. Antígeno D, KELL presentes. Amostra de soro ou plasma são utilizadas. Tenho também três técnicas, técnica em tubo ou placa, técnica do gel teste ou gel centrifugação ou AGH (soro de Coombs).

No método indireto a pesquisa é por anticorpos, quais são os anticorpos de interesse?

Eu tenho os anticorpos aglutinantes: capazes de aglutinarem as hemácias em solução salina e tenho os não aglutinantes em que sua fixação à membrana das hemácias não é capaz de provocar aglutinação em solução salina (apenas sensibilização). A maioria dos anticorpos aglutinantes são IGM e não aglutinantes são IGG.

Ainda tenho uma classificação de anticorpos em naturais que ocorrem naturalmente no plasma de indivíduos que não possuem o antígeno correspondente (anti a e anti b), geralmente são aglutinantes e classe IGM. Os indivíduos do grupo O, podem ter anti a e b da classe IGG. Os naturais são formados por estimulação passiva, no intestino, porque as bactérias residentes possuem em suas membranas carboidratos e açucares semelhantes aos do sistema ABO. Eles têm potencial para ativação do sistema complemento. Eles são mais reativos e isso complica as reações. Eles aparecem no soro ou plasma 3 a 6 meses após nascimento e produção máxima entre 5 e 10 anos. A sua produção declina a partir de 60 anos. Também são chamados de anticorpos frios, pois reagem em uma temperatura de 4º graus, portanto para reações eu posso pegar anti a e b e ir direto fazer a reação, sem necessidade de esperar atingir a temperatura ambiente.

...