Polimorfismo De Comprimento De Fragmentos Amplificados

FACULDADE INTEGRADA DE PERNAMBUCO

Curso de Odontologia – Matutino – 2º Período

Biologia Molecular

Edson Fróes

Taciana de Menezes

Vivian Kelly

Viviane Kelma

AFLP – Amplified Fragment Length Polymorphism

Polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados

Recife, 06 de Novembro de 2013

FACULDADE INTEGRADA DE PERNAMBUCO

Curso de Odontologia – Matutino – 2 Período

Biologia Molecular

AFLP – Amplified Fragment Length Polymorphism

Polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados

Este trabalho é referente a AFLP - Polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados, apresentados pelos alunos: Edson Fróes, Taciana de Menezes, Vivian Kelly, Viviane Kelma, do curso de odontologia, II período, turno manhã, como obtenção de nota para disciplina.

Recife, 06 de Novembro de 2013

RESUMO

Na partir da década de 70 foram desenvolvidas técnicas para isolar, cortar e sequênciar o DNA, sendo poderosas ferramentas para detectar, quantificar e investigar a variabilidade genética ( Costa et al. 2007). Essa técnica chamada de marcadores de DNA, são sequências de DNA que revelam polimorfismo entre indivíduos geneticamente relacionados.

Ferreira e Grattapaglia (1998) define marcadores moleculares como qualquer fenótipo molecular oriundo de um gene expresso ou de um segmento específico de DNA. Sendo entidades herdaveis possíveis de utilização na seleção de plantas, na utilização de melhoramento vegetal, tendo importancia na agronômia ( Oliveira et. al 2005).

A capacidade de detectar o polimorfismo do DNA modificou profundamente os estudos em genética e um dos maiores impacto da técnica de marcadores moleculares na detecção do polimorfismo do DNA é o emprego para análisar o mapeamento, clonagem e identificação de genes de doenças ( Costa et al. Apud The Hapmap Consortium, 2007).

É importante compreender o conceito de polimorfismo de DNA, que são as diferenças na sequência de DNA entre indivíduos. Sendo variantes genéticas que estão presentes na população em uma frequência maior do que 1%.

Os marcadores moleculares são utilizados para estudo de genética populacional, mapeamento genético, análise de similaridade e distância genética ( Lopes et al. 2002).

Existem diferentes tipos de marcadores como: RFLP ( fragmentos de DNA de comprimento polimorfico); PCR ( reação de polimerfismo em cadeia); Mini e microsatélites ( sequências adjacentes que se repetem em número variado); RAPD ( polimorfismo de DNA amplificado acaso); AFLP ( polimorfismo no comprimento de fragmento amplificado); e SNP ( polimorfismo de nucleotídeos únicos).

Este trabalho aborda sobre o marcador AFLP, técnica derivada da PCR, data de 1994. Que revela a variabilidade genética, sendo sensível, rápido e simples. Os AFLP revelam vários locos dispersos pelo genoma sem exigir conhecimento prévio da informação genética de sequências-alvo ( Lopes et al. 2002). É um método cada vez mais utilizado.

INTRODUÇÃO

Sabendo que marcadores moleculares são seqüências de DNA que diferenciam dois ou mais indivíduos.Devido ao fato de serem características herdáveis e estáveis, pesquisadores os utilizam para construção de mapa genético, avaliar e aumentar informações de uma espécie, maximizando as diferenças e aumentando a diversidade genética.

A análise de informações gênicas tem tido grande avanço com a utilização dos marcadores moleculares. Com a evolução dessas técnicas, cada vez mais informações são descobertas. No entretanto, uma das desvantagens é o custo de algumas técnicas, o que dificulta sua utilização na rotina dos laboratórios. Outro problema é a extrema sensibilidade à contaminação de algumas dessas técnicas, ocasionando resultados de interpretação duvidosa. A técnica estudada no presente trabalho é AFLP, técnica qual, que consiste na combinação do RFLP e do PCR. A técnica envolve a digestão de DNA com enzima de restrição, conforme requer uma análise de RFLP e a amplificação de segmentos do DNA do PCR (FERREIRA et al., 2001).

Essa técnica permite que fragmentos anônimos do genoma sejam amplificados por PCR após terem sido originados pela digestão do genoma por enzimas de restrição.

Um grande número de locos pode ser amostrado em um único gel AFLP. O número médio de locos polimorficos também é alto nestas amostras (FERREIRA, 2001). O polimorfismo obtido com AFLP está baseado em diferenças entre genótipos na distribuição dos sítios de restrição e na amplificação diferencial de fragmentos (MILACH, 1998).

Logo, pode-se pensar nesta técnica como uma técnica simples e de relativamente baixo custo, uma vez que as amostras tem alto número de marcadores obtidos por gel analisado.

O marcador AFLP é poderosa porque gera numerosos fragmentos de DNA a partir de nanogramas de DNA e como as condições de reação são estringentes, isso proporciona uma boa reprodutibilidade (LUCON, 1999). São muito empregados como método de identificação e detecção de fungos fitopatogênicos (LUCON, 1999) e na construção