Precipitação

1- Precipitação

 Baseada nos precipitados formados pela reação antígeno-anticorpo,

 A precipitação é máxima quando a quantidade de Ag e Ac são equivalentes (precipitados formados podem dissolver quando expostos a excesso de reagentes, devido à reversibilidade da reação),

1.1- Imunodifusão

 Difusão: processo pelo qual a substância é transportada, de um lado para outro, como resultado do movimento molecular ao acaso.

 O tamanho dos imunoprecipitado formados fica maior que o diâmetro dos poros da fase fixa e evita-se a difusão dos complexos Ag-Ac.

1.1.1- Tipo de imunodifusão:

 Imunodifusão simples em uma dimensão:

o Ac incorporado ao agar, sendo esta mistura colocada em um tubo até formar uma coluna. Após a gelificação, o Ag é colocado no topo do tubo. Os tubos são selados para evitar evaporação e colocados em temperatura constante durante um período, geralmente uma semana,

 Dupla imunodifusão:

o Precipitação ocorre na região de equivalência, perpendicular à linha de eixo entre os orifícios, apresenta sob a forma de linha ou arco de precipitação.

o Realização: coloca-se uma fina camada de ágar na placa de Petri, após gelificação faz orifícios onde são colocados Ag e Ac e incubada em câmara úmida por 18-48 h, a 37°C.

o Ausência de Ag ou Ac é indicada pela ausência de linha.

o Sensibilidade baixa e limita-se a detecção de complexos Ag-Ac em que há precipitação.

o

 Imunodifusão radial simples:

o Ágar é misturado com diluição apropriada do Ac específico e colocados em placa de Petri. São feitos orifícios onde coloca as soluções de Ag a serem testadas – pelo menos três diluições diferentes e um padrão. Incubado em câmera úmida. Havendo precipitação, o diâmetro do halo correlaciona com a concentração do Ag.

1.2- Técnicas que utilizam eletroforese

 Eletroimunodifusão:

• Eletroimunodifusão simples unidimencional (Ac incorporado ao gel, colocado em lâmina. O pH é secolhido de forma que os Ag fiquem com carga negativa e os Ac não migrem. Padrão de precipitação assemelha a foguete e caudo é proporcional à concentração do Ag),

• Eletroimunodifusão dupla unidimencional (Ag e Ac migram, simultaneamente, em direções opostas a partir de orifícios iniciais, resultando em precipitação em ponto intermediário),

• Imunoeletroforese,

 Realizado em duas etapas: a) separação dos componentes por eletroforese, b) imunodifusão de cada componente, a partir do seu centro de difusão, contra o anti-soro específico, (formando linha ou arco de precipitação).

2- Aglutinação

 Caracteriza-se pela formação de agregados visíveis como resultado da interação de Ac específicos e partículas insolúveis que contêm determinantes antigênicos em sua superfície,

 Aglutinação