A Coloração de Gram e Dosagem de Atividade Lipolítica

Título da Prática: Coloração de Gram e Dosagem de Atividade Lipolítica

Descreva e explique o teste de Coloração de Gram utilizado nas aulas práticas.

A Técnica da Coloração de gram é uma importante ferramenta laboratorial dentro da Microbiologia, auxiliando o laboratório no diagnóstico. A partir de características bioquímicas das bactérias as mesmas podem ser classificadas como gram positiva ou gram negativas, corando-se de roxo ou rosa respectivamente.

O que diferencia uma bactéria Gram + de uma Gram – neste teste?

Outro método de diferenciação é a detecção de quantidade de peptídeoglicano nas bactérias gram-positivas e nas bactérias gram-negativas. As bactérias gram-positivas serão azul-violeta, enquanto as gram-negativas serão vermelhas. A estrutura que as bactérias irão apresentar é outro aspecto que pode ser levado em consideração para diferenciar as bactérias gram-positivas das gram-negativas.

As bactérias gram negativas apresentam uma elevada concentração de lipídeos e uma delgada parede celular quando comparadas com as bactérias gram positivas. Sugere-se que quando há o tratamento com álcool, os lipídeos das bactérias gram negativas são retirados da parede celular, aumentando a permeabilidade da mesma e fazendo com que estas bactérias percam o primeiro corante (cristal violeta). As bactérias gram positivas, por possuírem uma menor concentração de lipídeos, se tornam desidratadas com o tratamento pelo álcool, diminuindo a permeabilidade da parede celular e retendo o primeiro corante. As bactérias Gram-positivas retêm a cor da coloração violeta de cristal na coloração de Gram. Isso é característico de bactérias que têm uma parede celular composta por uma camada espessa de uma determinada substância (especificamente, peptidologlicano contendo ácido teicóico e lipoteicóico complexado ao peptidoglicano).

Explique sucintamente o método de dosagem de atividade lipolítica.

O método de dosagem lipolítica consiste na quantidade de enzima que o substrato libera em 1mM de acido graxo por minuto em condições de temperatura e agitação em um certo período.

Demonstre os cálculos da atividade enzimática a partir dos dados obtidos na aula prática.

atividade=(∆V/∆t)*([ ]NaH*fc*60s)/(1000ml*1min)

atividade=((26,53-12,0 ml)/(1200 s))*(50 mM*1,04*60s)/(1000ml*1min)

atividade=0,012*3,12

atividade=0,03744 mmol/(L*min)

Convertendo unidades de medida:

1mmol → 10-3 mol

0,03744 mmol → X

X= 37,44x10-6 mol

1 mol → 10-6 mol

X → 37,44x10-6 mol

X= 37,44

Convertendo para unidade de atividade enzimática temos: