RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA - BIOLOGIA MOLECULAR
Por: Carlos Kramer • 1/9/2019 • Trabalho acadêmico • 393 Palavras (2 Páginas) • 753 Visualizações
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA - BIOLOGIA MOLECULAR -
Nomes: Francieli Rocha, Luana Salla, Thaiane Gomes e Wagner Gonçalves.
Grupo B02 Data da aula: 04/10/12 Data de entrega: 11/10/12
Aula: CLIVAGEM COM ENZIMA DE RESTRIÇÃO
OBJETIVO DA AULA
Realizar a clivagem de um produto de PCR com enzima de restrição.
RESULTADOS OBTIDOS
Através da enzima de restrição TaqI que reconhece a sequência 5'TCGA e 3'AGCT o DNA foi cortado da seguinte forma T 5-P 3-OH CGA
CGA 3-OH 5-P T.
QUESTÕES
- As enzimas de restrição são chamadas popularmente de ‘tesourinhas biológicas’. Explique a função experimental dessas enzimas.
Essas enzimas “picotam” a molécula de DNA sempre em determinados pontos específicos, chamados sítios de restrição. A clivagem leva a produção de fragmentos contendo pontas 5’ –P e 31 –OH livres. Esses “cortes” catalisam a destruição de uma ligação fosfodiéster entre dois nucleotídeos consecutivos ligados a determinadas bases. São importantes para detecção de polimorfismo, através da detecção de variações na seqüência de DNA; clivagem do DNA total, para produzir fragmentos de tamanho conhecido; gerar fragmentos para posterior clonagem molecular.
- Qual a importância do tampão e da temperatura adequados para o bom funcionamento de cada enzima?
A importância do tampão e da temperatura adequada é para fornecer um ambiente favorável para cada tipo de enzima. As enzimas de restrição necessitam do cofator Mg+ e temperaturas especificas (65ºC).
- Represente a sequencia de DNA das duas fitas após a clivagem com a enzima DdeI que reconheça o sitio descrito no exemplo abaixo.
5’-TGCTTAC^TAGCTACCA-3’
DdeI
3’- GAT^C -5’
GAT 3-OH 5-P C
5’- C^TAG -3’
C 5-P 3-OH TAG
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