Atividade colinesterase

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE

DEPARTAMENTO DE ANÁLISES CLÍNICAS E TOXICOLÓGICAS

DISCIPLINA DE TOXICOLOGIA

DANILO OLIVEIRA DOS SANTOS

EVELLYN KAROLINE MARTINS DE CARVALHO

SAMARA KAROLINE DANTAS COSTA

VANESSA SOUZA DE ARAÚJO

ATIVIDADE DAS COLINESTERASES SANGUÍNEAS

NATAL/RN

2019

1 INTRODUÇÃO

Um valioso indicador da relação entre exposição à agrotóxicos e problemas de saúde é o nível da enzima colinesterase no sangue. A inibição da colinesterase por meio dos compostos fosforados ou carbamatos provoca o acúmulo de acetilcolina, e o organismo passa a apresentar uma série de manifestações (efeitos muscarínios, nicotínicos e centrais).

É uma enzima cujo papel fundamental é a regulação dos impulsos nervosos através da degradação da acetilcolina na junção neuromuscular e na sinapse nervosa. Existem duas categorias de colinesterases: a acetilcolinesterase (colinesterase verdadeira), que é encontrada nos eritrócitos, no pulmão e no tecido nervoso; e a colinesterase sérica, sintetizada no fígado, também chamada de pseudocolinesterase.

Sua determinação é útil na avaliação e no acompanhamento de pacientes com intoxicação por organofosforados que inibem a colinesterase eritrocitária e diminuem os níveis da colinesterase sérica. A colinesterase sérica está diminuída nas doenças parenquimatosas hepáticas, na insuficiência cardíaca congestiva, nos abscessos e neoplasias.

2 OBJETIVO

Determinar a atividade de colinesterase plasmática em amostra de sangue.

3 METODOLOGIA

Para a determinação de ChE Plasmática em amostra de sangue, foi pipetado 9,0 mL de tampão fosfato pH 7,4 em um tubo de ensaio e em seguida adicionado 40 μL de plasma da amostra ao mesmo tubo e o mesmo foi homogeneizado. Em seguida, foi colhido 3,0 ml da amostra preparada para duas cubetas ( referencia e amostra). Após esse procedimento, 100 μL de DTNB (reagente de cor) foram adicionados as duas cubetas, homogeneizadas e em seguida o espectrofotômetro foi ajustado com a cubeta referência em 430 nm.

Para fazer a leitura da cubeta amostra, 50 μL de substrato Iodeto de acetiltiocolina foi adicionado a cubeta amostra. A colinesterase hidrolisa o substrato, com a liberação de grupo sulfidrílico livre ao nível de Tiocolina.O grupo SH livre reage com DTNB levando à formação de um composto amarelo, de absorção máxima em torno de 410nm.       Após a adição do substrato, o cronômetro foi disparado imediatamente, homogeneizamos por inversão para que após 30 segundos a primeira leitura (I) fosse realizada. Feita a primeira leitura (0,195), a segunda leitura (II) foi realizada após 3 minutos e 30 segundos da primeira. Obteve-se um valor de 0,426 na leitura.

4 RESULTADO E DISCUSSÕES

Para fazer o cálculo da atividade, foi usado a equação a seguir:

Atividade ChE Plasmática = (Abs. 2ª leitura – Abs 1ª leitura) x 25

Atividade ChE Plasmática = (0,426 – 0,195) x 25

Atividade ChE Plasmática = 5,775 U

5 CONCLUSÃO

Analisando o resultado e tendo como base o Valor de Referência da Atividade Plasmática que vai de 1,3 a 7,8 U, a atividade da ChE plasmática na amostra está dentro da normalidade.

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