Determinação de Metemoglobina em sangue

Relatório de aula prática de Análises Toxicológicas

Nomes: F e R - Biomedicina

Nome da aula:

Determinação de Metemoglobina em sangue

Finalidade:

Determinar a concentração de Metemoglobina em amostras de sangue

Fundamentos do método:

A metemoglobina encontrada em sangues normais em quantidade inferior a 2% consiste de hemoglobina sob a forma oxidada. Nela o átomo de ferro, encontra-se sob a forma férrica (Fe3+) incapaz de se ligar ao oxigênio e realizar seu transporte, e é reconvertida a hemoglobina por substâncias redutoras formadas num metabolismo de eritrócitos.

A metemoglobina pode estar aumentada em situações de exposição a substâncias químicas ou fármacos, que aumentam a oxidação, como por exemplo, anilinas, nitratos e nitritos, na deficiência de enzimas metemoglobinas redutase, que promovem a redução da metemoglobina à hemoglobina e em casos de presença de hemoglobina anormal hereditária.

A metemoglobina tem um pico de absorção a 630nm. Quando se adiciona KCN na amostra de sangue, ocorre a formação de cianometemoglobina, qual vai ter absorção mínima em 630 nm. É realizada uma leitura da amostra antes (AI) e depois (AII) de adicionar KCN e a diferença entre elas é diretamente proporcional a concentração de metemoglobina. Quando se acrescenta ferricianeto de potássio ao sangue, a hemoglobina total é convertida em metemoglobina (AIII), quando se adiciona o KCN nesta amostra a metemoglobina é convertida em cianometemoglobina (AIV), a diferença entre AIII e AIV é diretamente proporcional à metemoglobina formada. Portanto se tem uma relação entre a metemoglobina presente no sangue e a metemoglobina formada pela adição de ferricianeto de potássio.

Quanto se tem 15% ou menos de concentração de Metemoglobina no sangue, não se tem sintomas. De 15% a 20% apresenta Cianose leve, com sintomas leve (fadiga e dor de cabeça). De 20 a 45% se tem uma cianose evidente com sintomas moderados como fadiga, dor de cabeça, dispneia, síncope, incapacidade de se exercitar, tontura e fraqueza. De 45% a 70% apresenta cianose grade com sintomas graves como taquipnéia, acidose metabólica, disritmias, convulsão, depressão do SNC e coma. Mais que 70% tem se uma hipóxia grave, usualmente letal.

Reagentes, vidrarias (Anexar o roteiro)

O tubo para coleta de sangue utilizado havia heparina em seu interior, usada como anticoagulante.

1 tubo de ensaio

2 pipetas de vidro (1ml) e 3 pipetas de vidro (5ml)

2 beckers

1 Balão volumétrico (10 mL), 1 Balão Volumétrico (20 mL)

1 pipeta de Pasteur

2 cubetas

Fluxograma do método:

Resultados:

Leituras no espectrofotômetro (630nm),