BACTERIAS

1.0 INTRODUÇÃO

A técnica de Gram, também conhecida como coloração de Gram, é um método de coloração de bactérias desenvolvido pelo médico dinamarquês Han christian, em 1884, o qual permite diferenciar bactérias com diferentes estruturas de parede celular a partir das colorações que estas adquirem após tratamento com agentes químicos específicos. O método consiste em tratar sucessivamente um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor, com os reagentes cristal violeta, lugol, etanol-acetona e fucsina básica. As bactéricas que adquirem a coloração azul violeta são chamadas de Gram-positivas e aquelas que adquirem a coloração vermelho são chamadas de Gram-negativas.

Hans Christian Gram, um bacteriologista dinamarquês, estudou e definiu a técnica para corar bactérias, . Nesta ocasião, experimentalmente, corou lâminas com esfregaços (uma espécie de “raspa”, grosseiramente falando, de um determinado lugar do corpo ou de uma cultura que se queira fazer a pesquisa) com violeta de genciana e percebeu que se as bactérias existenstentes nestes esfregaços uma vez coradas não desbotavam com álcool, se previamente fossem tratadas com iodo,

As bactérias contidas no esfregaço podem ser classificadas como Gram-positivas (aproximadamente de cor azul) ou Gram-negativas (aproximadamente de cor vermelha), isto dependerá da parede celular da bactéria. Se for estruturalmente simples a coloração será positiva, se for estruturalmente complexa a coloração será então negativa.

Esta coloração permite distinguir os mais variados tipos de bactérias e que tipo de parede celular elas tem (se mais simples ou mais complexas, com mais ou menos peptideoglicanos – principal componente da parede celular bacteriana). As bactérias que descorarem quando submetidas à um solvente orgânico são Gram-negativas, e as que permanecerem coradas mesmo quando em contato com o solvente são denominadas Gram-positivas.

Estas bactérias de diferentes colorações tem também graus diferentes de virulência. As Gram-negativas, por exemplo, são constituídas por uma endotoxina denominada LPS (lipopolissacarídeo), que é causadora da patogenicidade. Já as Gram-positivas possuem a exotoxina rica em ácido lipoprotéico que confere aderência à bactéria.

2.0 PROCEDIMENTOS

Preparação da lamina

Pingar 1 gota de agua sobre a lamina esquentar e pinça no fogo passar na colônia de

Bactérias esfregar na lamina e fixar com fogo e corrar

Coloração de gram

Cubra o esfregaço com

violeta-de-metila e deixe por

. Adicione água sobre a lâmina coberta

com violeta-de-metila e deixe agir;

Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina

com lugol diluído e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;

Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;

Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que

não desprenda