ESTUDO DIRIGIDO HISTOLOGIA

I- Métodos de Estudo em Histologia:

1) Citar as etapas do processamento dos tecidos para observação ao microscópio.

1- Coleta do material de estudo: por biópsia ou necrópsia.

2- Clivagem: corte do material coletado em pedaços menores para fixação.

3- Fixação em formaldeído ou glutaraldéido para M.O. ou fixação dupla com glutaraldeído tamponado + tetróxido de ósmio para M.E.

4- Processar o material realizando uma desidratação com etanol, clarificação com xilol e infiltração em parafina.

5- Inclusão do material em parafina para M.O. ou resina plástica para M.E. formando cilindros ou cubos para corte em micrótomo.

6- Microtomia: corte dos cilindros ou cubos em micrótomo com lâminas de metal para M.O. e de vidro ou diamante para M.E.

7- Coloração da espécime: desparafinização, hidratação e aplicação do(s) corante(s) de histoquímica ou imunocitoquímica.

8- Selagem em goma de Damar diluída em xilol e recoberta por lamínula.

9- Observação.

2) Explicar a finalidade da etapa de fixação dos tecidos; citar exemplos de substâncias fixadoras.

A fixação dos tecidos é necessária para preservar as características da espécime mais próximas ao seu estado in-vivo. Ela evita a autólise das células e consequente decomposição do tecido, preserva o tecido para a coloração posterior, evita a proliferação de microrganismos, e preserva a bioquímica e antígenos (mortos) presentes na espécime.

3) Citar a função dos cromóforos e fluoróforos na observação de células e tecidos

Fluoróforo é um composto que emite luz de uma certo comprimento de onda (λ) (coloração) quando excitado por uma luz de um outro λ, e cromóforo é a região da molécula que causa uma alteração na conformação do conjunto ao receber luz.

4) Caracterizar corantes ácidos e corantes básicos; exemplificar.

Corantes ácidos são reativos com estruturas celulares acidófilas, que tem caráter básico. São utilizados principalmente para evidenciar mitocôndrias, grânulos de secreção, proteínas citoplasmáticas e colágeno. Exemplos de corante ácido são a eosina, orange G e fuscina ácida.

Os corantes básicos são reativos com estruturas celulares basófilas, que tem caráter ácido. São utilizados para evidenciar o núcleo das células (ácidos nucleicos), glicoproteínas ácidas, glicosaminoglicanos.

5) Citar os principais tipos de microscópio de luz (óptico) usados em biologia.

- Campo Claro: tecidos mortos e corados;

- Campo Escuro ou Contrates de Fase: tecidos vivos não corados;

- Microscopia de Fluorescência: usa corantes que aderem as moléculas de estruturas das células e que quando exitados emitem uma luz visível. Usado para analisar tecidos vivos.

- Microscopia confocal: semelhante à microscopia por fluorescência, porém não ilumina todo o campo, apenas um ponto. Um ou vários feixes de laser são usados como fonte de luz, que excita os cromóforos das moléculas fazendo com que elas emitam luz em outros comprimentos, esses comprimentos podem ser rastreados por um computador e esse pode criar imagens em 3d.

6) Citar os nomes e identificar os componentes mecânicos e ópticos do microscópio de luz (conferir no laboratório).

Lentes oculares, canhão e aclopamento; lentes objetivas e revolver; pinça, platina, charriot, parafuso dos ajustes de foco micro e macrométrico, diafragma do condensador, condensador de luz, lâmpada, dimmer da lâmpada; braço e base.

7) Citar os nomes dos componentes do microscópio eletrônico de transmissão.

Catodo e anodo do canhão eletrônico. Lente condensadora, bobina elétrica, porta espécime, lente objetiva, lente intermediária, lente projetora, placa fluorescente, filme fotográfico e câmera CCD.

8) Citar a principal diferença entre a microscopia eletrônica de transmissão (MET) e a microscopia eletrônica de varredura - scanning (SEM).

Na MET o feixe de elétrons atravessa a amostra para gerar a imagem, mas na SEM os elétrons varrem a superfície da espécime que foi impregnada com metais, e os átomos de metais repelem os elétrons que são capturados por um detector e transmitidos para um amplificador, o qual gera um sinal que será convertido em uma imagem pseudo 3D por um computador e exibida em um monitor.

9) Explicar a formação de imagens eletrondensas e eletronluscentes em microscopia eletrônica.

Os elétrons são desviados por porções do objeto que contêm átomos de elevado peso molecular. Essas regiões ficam escuras, são eletrodensas. As partes da amostra através das quais os elétrons passam aparecem claras, são eletrolúcidas.

10) Calcular as ampliações das imagens do seu microscópio de luz considerando as lentes objetivas e oculares.

Ampliação final = ampliação da lente oculare X ampliação das lentes objetiva.

11) Explicar em que consiste o limite de resolução de imagens.

O limite de resolução consiste na capacidade das lentes em separarem as imagens de objetos próximos, é a distinção entre dois pontos diferentes na imagem.

12) Citar as características das técnicas de coloração histoquímica.

As técnicas de histoquímica consistem em aplicar substâncias que possuem alta afinidade com as moléculas a serem observadas nas células ou MEC, ou corantes específicos que reagem com substâncias presentes nas células ou MEC do tecido que deseja analisar-se (especificidade e sensibilidade).

13) Citar o nome da “substância” identificada com as técnicas de Feulgen, PAS e Alcian Blue.

Feulgen: DNA.

PAS: polissacarídeos (glicogênio, glicosaminoglicanos) e oligossacarídeos (glicoproteínas)