Extraçao De Dna

GESSICA MAGALI PRESTES FERNANDES

P-34

EXTRAÇÃO DO DNA VEGETAL

PRÁTICA I E II

Taciana – Biologia Molecular

Londrina

2014

Gessica Magali Prestes Fernandes

P-34

Relatório aula pratica

Extração de DNA

Tampão de CTAB

Relatório de aula Prática do curso Técnico

Em Biotecnologia, Senai

Entregue a orientadora Taciana, na matéria

De Biologia Molecular.

Sobre extração de DNA para fins avaliativos.

Londrina

2014

Sumário

1.Introdução 4

2.Objetivo 4

3.Materiais e Métodos 5

4.Resultados e Discussão: 7

4.1 Qual a função da Maceração? 7

4.1.2 Rompimento das membranas das células das frutas 7

4.1.3 Função do Sal 7

4.1.4 O papel do Álcool: 7

4.1.5 Resultados 7

5.Para a extração do DNA com o tampão de CTAB 8

5.1 Métodos empregados a essa técnica 8

6. Conclusão 9

7.Referências 10

1.Introdução

O DNA é uma macro- molécula orgânica que contém as informações genéticas e está presente em todos os seres vivos, com exceção apenas de alguns RNA-vírus. É formado por uma base nitrogenada, uma pentose e um grupo fosfato. Essa importante molécula contém as informações básicas para a formação de um ser vivo e para que ele possa se reproduzir.

Em células eucariontes de folhas de “mato” e frutas, a maior parte do DNA está situada no núcleo. O processo de extração dos ácidos nucléicos do núcleo faz com que ocorra o rompimento da membrana plasmática e do envoltório nuclear. Esse procedimento ocorre com o uso de detergentes que afetam as interações entre lipídios e proteínas. Após o rompimento das membranas, o conteúdo celular extravasa, podendo então ser extraídas as moléculas de DNA por meio da centrifugação do composto, em presença de solventes orgânicos (ex.: álcool) e Nacl.

2.Objetivo

Esse experimento teve como objetivo a extração das moléculas de DNA de morango, banana, laranja, mamão e também com a técnica de tampão de CTAB em folhas” mato”.

Entender os conceitos de genética básica e demonstrar como podemos identificar e extrair o DNA de frutas de folhas.

Tem também como nos exemplificar que a extração do DNA é o primeiro passo para muitas aplicações biotecnológicas.

 Clonagem-transferência de genes

 Tipagem molecular

 Marcadores moleculares

 PCR 

3.Materiais e Métodos

 Almofariz

 Béquer

 Pistilo

 Tubo de ensaio

 H2O

 Álcool

 Detergente

 Sal de cozinha

 Peneira

 Bastão de vidro

 Frutas (morango, laranja, banana e mamão)

1) Selecionar 3 morangos e tirar os seus cabinhos verdes.

2) Colocar os morangos dentro de um almofariz e macerá-los pressionando os morangos com o pistilo até obter uma pasta quase homogênea. Transferir a pasta de morango para um béquer.

3) Em outro copo misturar 150 ml de água, uma colher (sopa) de detergente e uma colher (chá) de sal de cozinha. Mexer bem com o bastão de vidro, porém devagar para não fazer espuma.

4) Colocar cerca de 1/3 da mistura de água, sal e detergente sobre o macerado de morango. Misturar levemente com o bastão de vidro.

5) Incubar em temperatura ambiente por 30 minutos. Mexer de vez em quando com o mesmo bastão.

6) Colocar uma peneira sobre um copo limpo e passar a mistura pela peneira para retirar os pedaços de morango que restaram.

7) Colocar metade do líquido peneirado em um tubo de ensaio. Colocar apenas cerca de 3 dedos no fundo do tubo.

8) Despejar delicadamente no tubo (pela parede do mesmo), sobre a solução, dois volumes de álcool comum. Não misturar o álcool com a solução.

9) Aguardar cerca de 3 minutos para o DNA começar a precipitar na interfase.

10) Passo opcional. Usar um palito de vidro, plástico ou madeira para enrolar as moléculas de DNA. Gire o palito na interface entre a solução e o álcool.

Obs.: Fazer esse mesmo procedimento com todas as frutas, e então observar o que acontece e fazer a discussão.

 

4.Resultados e Discussão:

4.1 Qual a função da Maceração?

O morango precisa ser macerado