PERMEAÇÃO DE ÁGUA E SOLUTOS EM HEMÁCIAS - HEMÓLISE

Introdução

As células são constituídas por citoplasma, núcleo e organelas. A membrana que envolve as células separa o interior da mesma do meio extracelular, esta membrana contém poros que permitem a passagem de substâncias. As hemácias são células anucleadas, constituídas apenas por membrana plasmática e citoplasma. Elas se encontram em equilíbrio osmótico com o meio extracelular, devido à circulação sanguínea e o transporte de oxigênio e energia (ATP), que é utilizado pelas ATPases Na+ e K+ da membrana, como fonte de energia para o bombeamento de Na+ do interior para o extracelular e K+ do meio extracelular para o intracelular. As hemácias originam se na medula óssea pela proliferação e maturação dos eritoblastos. As funções primordiais dos glóbulos vermelhos são a de transportar oxigênio dos pulmões par os tecidos, mantendo a perfusão tissular adequada, e transportar CO2 dos tecidos para os pulmões. A vida das hemácias é relativamente curta, entre 100 e 120 dias na circulação, sendo removidas e renovadas as hemácias velhas da circulação. As hemácias têm uma forma homogênea de corpúsculos circulares bicôncavos, e de tamanho relativamente uniforme; permitindo assim as hemácias variarem o volume, principalmente aumentar-no, sem que haja estiramento da membrana. Quando ultrapassado o volume crítico, a hemácia atinge uma forma esférica, atingindo aumentos subseqüentes de volume, acontecendo assim hemólise com liberação do conteúdo celular (hemoglobina) para o meio extracelular.

Objetivo

Demonstrar e ilustrar os seguintes aspectos relacionados com o movimento de água através da membrana celular:

a) osmose;

b) pressão osmótica;

c) equilíbrio;

d) osmolaridade;

e) fluxo de volume

f) coeficiente de reflexão.

Materiais

• Heparina ou oxalato de sódio (anticoagulante)

• Sangue

• Bastão de vidro

• Papel absorvente

• Estante para tubos de ensaio

• 18 tubos de ensaio de 15 ml

• Água destilada

• 8 pipetas cilíndricas de 10 ml

• Luvas

• Centrífuga

Soluções:

• NaCl - 150mM, 500mM e 100 mM

• Uréia - 300mM e 500 mM

• Sacarose - 300mM e 500 mM

• Cloreto de Amônio - 150 mM

Métodos

1- Colocou-se 2 mL de sangue humano e adicionou-se anticoagulante na concentração aproximada de Heparina: 0,2 mg/mL ou Oxalato de Na+: 1 a 2 mg/mL de sangue;

2- Preparou-se uma bateria de 11 tubos de ensaio contendo soluções na NaCl de concentrações decrescentes, obtidas por mistura de água a NaCl – 150 mM nas seguintes proporções em volume (ml): 0/10; 1/9; 2/8;... 9/1; 10/0. Homogeneizou-se a mistura por agitação;

3- Adicionou-se 80 µm de sangue (aproximadamente 3 a 4 gotas) a cada um dos tubos, cobriu-se os com o dedo polegar limpo e inverteu-se lentamente para misturar sem formação de espuma;

4- Centrifugou-se os tubos a 3000 rpm durante 3 minutos. Retiraram-se os cuidadosamente da centrífuga. Observou-se o aspecto do sobrenadante, o volume e o aspecto do sedimento. Descreveram-se os fatos observados, classificando-se e anotando-se os tubos de acordo com o aspecto das soluções.

Resultados

Para a obtenção dos resultados, utilizou-se de fórmulas já prontas que iriam auxiliar na determinação da concentração de NaCl em cada amostra, da osmolaridade e do valor da pressão osmótica (atm).

Para calcular-se a concentração usou-se a fórmula básica da regra de três, sabendo-se que na primeira amostra havia 150 ml de NaCl, assim fazendo a proporção de quantidades presentes nas amostras subseqüentes. Notou-se que esse valor diminuía sempre com a proporção de menos 15 mM a cada amostra analisada, chegando a 0 mM na amostra de número 10, qual só havia água.

Para a obtenção da osmolaridade que é dada em mOsm/L, usou-se da fórmula seguinte:

Onde: i = o número de moléculas existentes, no caso duas, uma de sódio (Na) e outra de cloro (Cl);

C = concentração de NaCl, calculada anteriormente,

x = osmolaridade em mOsm/L.

Para o cálculo da pressão osmótica, também se usou de uma fórmula já pronta, que é a seguinte:

Onde: π = é a pressão medida em atm;

R = é a pressão exercida pela célula (hemácia), que vale 0,082 atm/mosmol/L;

T = é uma constante de temperatura, também da célula (hemácia), que vale 300 K;

i = o número de moléculas existentes, no caso duas, uma de sódio (Na) e outra de cloro (Cl);

C = concentração de NaCl.

Após cálculo dos resultados, obtiveram-se as seguintes tabelas:

Tabela 1 – 1ª Bateria – Teste da resistência globular

Nº do tubo

NaCl 150 mM (ml)

Água

(ml)

[NaCl]

(mM)

Osmolaridade

(mOsm/l)

(atm)

00 10 0 150 300 7,38

01 9 1 135 270 6,64

02 8 2 120 240 5,9

03 7 3 105 210 5,16