Relatório - Coloração De Gram

A técnica de Gram ou coloração de Gram é uma técnica de coloração de preparações de amostras para observação ao microscópio, utilizada para corar diferencialmente microorganismos com base na composição química e integridade da sua parede celular. Consoante a cor que adquirem, são classificados em gram-positivos (roxo) ou gram-negativos (vermelho). Tal método se deve ao médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram. Esta técnica teve por objetivos determinar e interpretar o mecanismo de reação de Gram, como um método de coloração diferencial.

O método consiste no tratamento de uma amostra bacteriana crescida em meio sólido ou líquido, com um corante primário, o cristal violeta, seguido de tratamento com um fixador, o lugol. Tanto bactérias Gram-positivas quanto Gram-negativas absorvem de maneira idêntica o corante primário e o fixador, adquirindo uma coloração violeta devido à formação de um complexo cristal violeta-iodo, insolúvel, em seus citoplasmas. Segue-se um tratamento com um solvente orgânico, o etanol-acetona. O solvente dissolve a porção lipídica das membranas externas das bactérias Gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é removido, descorando as células. Por outro lado, o solvente desidrata as espessas paredes celulares das bactérias Gram-positivas e provoca a contração dos poros do peptideoglicano, tornando-as impermeáveis ao complexo; o corante primário é retido e as células permanecem coradas. Em seguida, a amostra é tratada com um corante secundário, a fucsina básica. Ao microscópio, as células Gram-positivas aparecerão coradas em violeta escuro e as Gram-negativas em vermelho.

Desta forma, a diferença estrutural da parede bacteriana e, em particular a espessura da camada de peptideoglicano, é a responsável pelo diferente comportamento das bactérias face à coloração de gram.

Objetivos

Demonstrar a importância da coloração e distinguir as bactérias gram positivas e gram negativas.

Materiais

Lâminas, Placas de Petri, Béquer, Álcool 70, Água, Óleo de Imersão, Solução de Cristal violeta, Lugol, Fucsina, Alça de platina, Microscópio óptico, Bico de Bunsen, Tubo de Falcone.

Procedimento

Após as instruções para o procedimento, dividiram-se os trios. O nosso escolheu a técnica 2: Staphylo aureus.

1. lavagem das mãos

2. lavagem da lâmina com álcool 70 e gaze

3. esterilização da alça de platina no Bico de Bunsen

4. homogeneização do material do tubo de Falcone

5. coleta do material que está no tubo de Falcone com a alça de platina fria, próximo à chama

6. esfregar a alça na lâmina para a passagem do material

7. esterilização da alça novamente, e armazenamento da mesma

8. secar a amostra da lâmina no Bico de Bunsen, para fixar o esfregaço (três vezes)

9. iniciar o processo de coloração

Cobrir toda a lâmina com solução violeta, aguardar um minuto;