Relatório De Aminoácidos

1- INTRODUÇÃO

Os aminoácidos são divididos em quatro partes: o grupo amina (NH2), grupo carboxílico (COOH), hidrogênio, carbono alfa (todas as partes se ligam a ele), e um radical característico de cada aminoácido.

Os aminoácidos se unem através de ligações peptídicas, formando as proteínas. Para que as células possam produzir suas proteínas, elas precisam de aminoácidos, que podem ser obtidos a partir da alimentação ou serem fabricados pelo próprio organismo.

As proteínas são as macromoléculas biológicas mais abundantes que ocorrem em todas as células e em todas as partes das células, variam de tamanho dos pequenos peptídeos até polímeros enormes com pesos moleculares de milhões. As proteínas exibem uma enorme diversidade de funções biológicas e são os produtos finais mais importantes das vias da informação genética. Todas elas são constituídas por um conjunto de 20 aminoácidos, ligados de maneira covalente em sequências lineares características. A partir dessas tem-se umas variedades de produtos como as enzimas, hormônios, anticorpos, transportadores, fibras musculares, etc.

Existem várias reações que caracterizam aminoácidos e as proteínas, tendo-se a possibilidade, pela diferença da reação, de identificar a natureza de uma substância desconhecida, caso esta seja de natureza proteica.

2- OBJETIVO

Esta prática teve como objetivos caracterizar a presença de material biológico em proteínas através de testes que reconheçam a presença de aminas primárias presentes em solução (reação da ninhidrina); a presença de peptídeos com mais de três resíduos de aminoácidos (reação do biureto); a presença de arginina na cadeia peptídica (reação de sakaguchi); a presença de aminoácidos sulfurados (reação para aminoácidos sulfurados).

3- MATERIAIS E REAGENTES:

* Tubos de ensaio;

* Pipetas de 1,0; 2,0 e 5,0 mL;

* Clara de ovo;

* Gelatina (sem sabor) a 2 %;

* Solução de NaOH a 2,5 mol/L; 6,0 mol/L e a 4 %;

* Solução de acetato de chumbo a 10 %;

* Reativo de Millon;

* Reativo de Hopkins Cole;

* Solução alcoólica de alfa-naftol a 0,4 %;

* Solução de hipoclorito de sódio a 6,0-7,0 %;

* Reativo de biureto;

* Solução de ninhidrina a 0,1 %;

* Ácido nítrico concentrado;

* Ácido sulfúrico concentrado;

* Ácido acético concentrado.

4. PROCEDIMENTOS E DISCUSSÕES:

I - Reação de aminoácidos sulfurados:

Esta reação é utilizada para verificar a presença de aminoácidos sulfurados em solução. Foi pipetado, em tubos de ensaio distintos, 1 mL da solução de clara de ovo e 1,0 mL da solução de gelatina. Em seguida, adicionou-se em ambos 1 ml de NaOH a 6,0 mol/L e as soluções foram aquecidas em chama direta. Adicionaram-se, então, gotas de acetato de chumbo a 10% e ácido acético concentrado:

Na reação para aminoácidos sulfurados, o aquecimento de proteínas em meio alcalino resulta na liberação de enxofre da cisteína e da cistina, sob a forma de sulfato. O sulfato é evidenciado pela adição de acetato de chumbo, dando precipitado castanho ou preto de sulfeto de chumbo. A solução de clara de ovo apresentou coloração escura, o mesmo não pode ser observado na solução da gelatina.

II - Reação de Millon:

Os fenóis, quando aquecidos com sais mercuriais, formam derivados mercuriais que, em presença de HNO3, sofrem nitração, formando compostos de coloração vermelho tijolo. A tirosina é o único aminoácido encontrado em proteínas que contém grupo fenólico. Portanto, somente as proteínas que contém tirosina dão a reação de Millon positiva.

Foram colocados 1,0 mL de solução de clara de ovo em um tubo de ensaio e 1,0 mL da solução de gelatina em outro. Adicionou-se 1,0 mL do reativo de Millon a cada um deles e ambos foram aquecidos em chama direta por 30 s:

A solução de gelatina não alterou a coloração, o que indica um resultado negativo para a presença de tirosina. Já a solução de clara de ovo, obteve uma coloração parda, o que indica a presença de tirosina.

III - Reação de Hopkins-Cole:

Em tubos de ensaio distintos, foram colocados 1,0 mL da solução de clara de ovo e 1,0 mL da solução de gelatina. Acrescentou-se 3,0 mL do reativo de Hopkins-Cole a cada um deles. Com os tubos inclinados foi adicionado 2,0 mL de ácido sulfúrico concentrado (20 gotas = 1,0 mL), deixando escorrer pela parede dos tubos:

Na presença de ácidos, muitos aldeídos se condensam com o anel indólico do triptofano, formando compostos coloridos. Na reação de Hopkins-Cole, as proteínas que contém triptofano reagem com o ácido glioxílico (que contém um grupamento aldeídico ligado a uma carboxila) e, pela ação do H2SO4 concentrado, formam composto de cor violeta, na interface.

Aguardado alguns minutos, observou-se a formação de um anel violeta na solução de clara de ovo, o que indica a presença de triptofano. Já na solução de gelatina não foi observado mudança na cor, resultado negativo.

IV - Reação de Sakagushi:

Esta reação é utilizada para verificar a presença da arginina em solução. Foi pipetado 1 ml da solução de clara de ovo e 1,0 mL da solução de gelatina em tubos de ensaio distintos. Em seguida, adicionou se 1,0 mL de NaOH 2,5 mol/L, 0,5 mL de alfa-naftol a 0,4% e 1,0 mL da solução de hipoclorito de sódio em cada tubo:

Os aminoácidos que contém produtos de substituição das guanidinas dão coloração vermelha quando tratadas com alfa-naftol e hipoclorito