Relatório De Microbiologia

FUNDAÇÃO CECIERJ – CONSÓRCIO CEDERJ

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO – UFRJ

CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

ROBERTA CRISTINA DA SILVA CONCEIÇÃO

RELATÓRIO 2 DE MICROBIOLOGIA

COLORAÇÃO DE ESFREGAÇO DE MATERIAL BIOLÓGICO

PELO MÉTODO DE GRAM

VOLTA REDONDA

AGOSTO/2014

INTRODUÇÃO:

A Técnica de Gram ou coloração de Gram é uma técnica de coloração utilizada para a preparação de amostras para observação ao microscópio, utilizando corantes para diferenciar microorganismos com base na composição química e integridade da sua parede celular. Essa técnica recebeu esse nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram.

Gram, ao observar que as bactérias após serem tratadas por diferentes corantes, adquiriram cores diferenciadas, ou seja, as roxas foram classificadas como gram-positivas e as que ficaram vermelhas, foram classificadas como gram-negativas, isso por volta de 1884. Já em 1885, ele publicou um método de coloração de bactérias, e essa técnica é utilizada até hoje na taxionomia e na identificação de bactérias, em laboratórios de bacteriologia.

Neste processo de identificação, as bactérias são submetidas primeiramente um corante de ação violeta, e em seguida um fixador lugol, descoloração com álcool e depois coradas novamente com um corante de ação vermelha.

OBJETIVO:

Explicar porque bactérias com componentes estruturais diferentes podem ser diferenciadas quando coradas pelo método gram;

Sequenciar os procedimentos da coloração de Gram e os princípios físico-químicos que reagem cada um desses procedimentos;

Observar a diferença das bactérias gram positivas e gram negativas das amostras coletadas;

Apresentar provas da existência de micróbios intimamente associados aos tecidos do nosso corpo.

MATERIAIS:

• Lâmina de vidro para microscopia;

• Lamparina a álcool;

• Cotonetes;

• Caneta de retroprojetor;

• Solução de cristal violeta constituída por 1 g de cristal violeta, 10 ml de álcool a 95 º GL, 2 g de fenol e 100 ml de água destilada;

• Solução de iodo, conhecida como lugol constituída por 1 g de iodo metálico, 2 g de iodo de potássio e 300 ml de água destilada.

• Solução de fucsina constituída por 30 mg de fucsina básica, 10 ml de álcool a 95º GL, 500 mg de fenol e 90 ml de água destilada.

• Álcool a 95º GL;

• Pia com torneira;

• Frasco com água;

• Becker para recolhimento de resíduos;

• Papel toalha;

• Microscópio óptico;

• Óleo para imersão.

METODOLOGIA:

1. Primeiramente deve ser feito a limpeza da lâmina tirando toda a gordura com a lamparina e o álcool;

2. Coletar o material com o cotonete, esfregando o mesmo na gengiva. Logo após, esfregar esse material na lâmina de vidro, e marcar a face contrária da mesma, onde o esfregaço foi feito;

3. Para a fixação do material, deve ser passar a lâmina ao lado contrário de onde está o esfregaço na lamparina, para que a lâmina fique levemente aquecida; Na coloração, deve-se colocar a lâmina com o esfregaço voltado para cima, gotejar a solução de cristal violeta, de maneira que cubra todo o esfregaço e deixar por um minuto;

4. Deixar escorrer o excesso dentro do Becker. Gotejar também a solução de lugol em cima do esfregaço