Cromatografia Por Bioafinidade

UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARANÁ – UNIOESTE

MATHEUS PIASECKI

TRABALHO DE ANÁLISE INSTRUMENTAL

CROMATOGRAFIA POR BIOAFINIDADE

TOLEDO – PR

2013

1. TÍTULO: Cromatografia por bioafinidade.

2. CONCEITO E PRINCÍPIO DO MÉTODO.

A cromatografia por bioafinidade é a técnica cromatográfica baseada no isolamento seletivo de macromoléculas biológicas, por meio da interação com as fases estacionária e móvel. Condições de pH, diferença de afinidade e de força iônica do meio podem alterar a interação entre o componente e a fase estacionária, ligando ou liberando a molécula.

Esse tipo de cromatografia se difere das demais por basear-se em métodos biológicos de interação e separação das moléculas, em vez de processos químicos e físicos.

3. MECANISMO DE SEPARAÇÃO.

O mecanismo de separação das moléculas se baseia na afinidade das mesmas com a fase estacionária. A variação de pH, de forças iônicas e a diferença de afinidade é que rege a eluição dos compostos. Quando o pH ou as forças iônicas do meio são favoráveis, um composto se liga à fase estacionária, permanecendo na coluna. Se o pH ou as forças iônicas variam, esse composto pode se separar da fase estacionária e eluir para o final da coluna.

A diferença de afinidade entre compostos também define a velocidade de eluição das moléculas. Se um composto tem mais interações com a fase estacionária do que outro que está ligado a ela, essa ligação é terminada, e o composto mais afim da FE é retido, enquanto o outro composto, com menos interações, é eluído.

4. RECHEIOS DE COLUNAS.

A coluna para a cromatografia por bioafinidade é composta por um material de recheio sólido e poroso, no qual a fase estacionária está adsorvida. Geralmente, utiliza-se sílica ou terra diatomácea como suporte, adsorvendo-se a fase estacionária no mesmo. A fase estacionária deve ser composta por um ligante específico, assim baseando-se nas propriedades dos compostos biológicos de unirem-se reversivelmente à ela.

5. EQUIPAMENTOS.

A cromatografia por bioafinidade não demanda de equipamentos adicionais além da aparelhagem básica de cromatografia em coluna. São necessários uma coluna de cromatografia, na qual será adicionada o recheio adsorvido à fase estacionária; um sistema de bombeamento que adicionará a amostra e bombeará a fase móvel para dentro da coluna; um reservatório para a fase móvel; um medidor de pressão; uma válvula para amostragem; e um sistema de detecção adequado.

6. APLICAÇÃO.

A cromatografia por bioafinidade pode ser aplicada à uma gama de substâncias biológicas, tais como enzimas, ácidos nucleicos, hormônios, vitaminas, anticorpos, lectinas, células e proteínas em geral, separando substratos, cofatores, antígenos,