Medição de açucares

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Universidade Federal de Minas Gerais-UFMG

Instituto de Ciências Agrárias-ICA

Engenharia de Alimentos

Prática 02: Medida de açúcar

Disciplina: Laboratório de Engenharia Bioquímica

Professor(a):Igor Viana Brandi

Técnico: Sandro Soares

Aluno(a):Amanda Letícia Araújo Santos

Montes Claros-MG

2017

Introdução

A glicose é um dos mais importantes monossacarídeos presente no grupo dos carboidratos, possui estrutura simples composta apenas por carbono, oxigênio e hidrogênio. Tem grande importância no organismo, por fornecer energia e também é importante por unir-se a outra molécula e formar dissacarídeos, que são muito importantes em alimentos, tais como :sacarose, maltose, lactose entre outros.

O DNS é um método de determinação de açúcares e é realizado no espectrofotômetro. De acordo com Carvalho (2013) O método DNS utiliza a característica redutora de açúcares para sua quantificação. O princípio vem através de uma molécula chamada ácido 3,5 – dinitrossalicílico (DNS) que quando puro apresenta uma coloração alaranjada, este ácido é facilmente reduzido por açúcares, embora possa apresentar menor eficiência se a solução utilizada possuir outras espécies redutoras fortes. Quando reduzido, o DNS se torna ácido 3-amino – 5 – nitro salicílico, e passa a apresentar-se com uma coloração acastanhada.

Os testes de açúcares são baseados em reações de óxido–redução pelo grupo hidroxílico hemiacetálico do monossacarídeo, que pode reagir com íons e formar complexos coloridos (BOBBIO e BOBBIO, 2005), através dessa mudança de coloração é possível construir roteiros de ensaios colorimétricos e medir a quantidade de açúcares relacionando a quantidade de DNS reduzido.

Os espectrofotômetros são aparelhos que realizam diversos tipos de análises e abrange diversas áreas de atuação. Muitas empresas e laboratórios vem utilizando desse equipamento devido seu resultado ser rápido e eficiente.

Objetivo

Construir uma curva padrão de glicose utilizando o Excel e determinar a equação da reta resultante.

3-Materiais e métodos

As amostras utilizadas para o experimento foram de soluções de glicose. O Experimento foi realizado no laboratório de biotecnologia, localizado no instituto de ciências agrarias ICA, Universidade Federal de minas Gerais -UFMG, Montes Claros, MG.

3.1-Materiais

Ácido 3,5 dinitrossalicilico DNS

Agua destilada

Balança

Balão volumétrico

Béquer

Ebulidor

Espectrofotômetro

Fenol

Glicose

Grade para os tubos de ensaio

Metabissulfito de sódio

NaOH

Pipetas

Tártaro duplo de sódio e potássio

Tubos de ensaio

Vórtex

3.2-Métodos

Para realizar o experimento, foram separados 5 tubos de ensaio, todos numerados. Foi adicionado em cada tubo a amostra de glicose padrão com as seguintes concentrações:1g/L,0,8g/L,0,4g/L e 0,2g/L, ou seja, foi adicionado 1ml no 1ºtubo,0,6ml no 3º tubo,0,4ml no 4º tubo e 0,2ml de amostra padrão de glicose n 5º tubo. Os 5 tubos foram levados ao banho Maria a 100°C por 5min. Em seguida foram retirados e resfriados em água corrente.

Após esses procedimentos, em cada tubo de ensaio foi adicionado 8,5ml de água destilada visando elevar o volume a 10ml.Em seguida, os tubos foram homogeneizados no vórtex e levados ao espectrofotômetro, onde foram feitos as leituras de cores no comprimento de onda de 540nm.

Através desse procedimentos foi possível construir uma curva-padrão e estabelecer uma reta resultante pelo método de regressão linear dos mínimos quadrados.

A formula utilizada foi: Y=ax+b onde: “y” representa absorbância e “x” a concentração da substância.

• Preparo do reagente DNS

Foram dissolvidos 3,53g de ácido 3,5dinitrossalicílico e 6,0g de NaOH em 472ml de água destilada. Logo em seguida foram acrescentados 102g de tártaro duplo de sódio e potássio. Por conseguinte, adicionou-se 2,53ml de fenol e 2,76g de metabissulfito de sódio. Completou-se ,por fim, para 500ml.

• Preparo do Branco

Foram utilizado 1ml de agua como amostra no lugar da glicose e em seguida, adicionou-se 0,5ml do reagente DNS e simultaneamente com os outros tubos da curva padrão, foram conduzidos ao banho Maria e em seguida resfriados. Adicionou-se água destilada no branco para elevar se volume do tubo de ensaio para 10ml.

As imagens abaixo relatam etapas do procedimento de medição do açúcar pelo método DNS:

  Figura 1: reagentes                          Figura 2:concentrações diferentes de [pic 3][pic 4]

                                                                  Glicose.

   

                

Fonte: Próprio autor                                    Fonte: Próprio autor

Figura 3:concentrações de glicose

Completadas com 8,5ml de agua destilada.                                                         [pic 5]

Fonte: Próprio autor

Resultados e discussão

As absorbâncias das soluções padrão, utilizadas foram as seguintes:

Amostras g/L	Absorbância
Branco	0
0,2	0,024
0,4	0,036
0,6	0,050
0,8	0,062
1,0	0,0083

Tabela 1-valores das concentrações e respectivas absorbâncias.

Fonte: Próprio autor

A tabela 2 mostra os valores das diluições com os seguintes acréscimos: água, DNS, e também o valor total de 10ml.

Tabela 2-valores do procedimento para obtenção da curva padrão de glicose.

Tubos	Glicose (ml)	Água (ml)	DNS (ml)	Água (ml)	Total (ml)
1	1	0	0,5	8,5	10
2	0,8	0,2	0,5	8,5	10
3	0,6	0,4	0,5	8,5	10
4	0,4	0,6	0,5	8,5	10
5	0,2	0,8	0,5	8,5	10

Fonte: Próprio autor