Atividade catalase na presença e na ausência de um íon metálico

INTRODUÇÃO

Determinadas substâncias podem inibir a atividade de algumas enzimas, diminuindo-a ou eliminando-a totalmente; são os inibidores enzimáticos.

A inibição enzimática pode ser reversível ou irreversível. A inibição reversível pode ser competitiva, que é quando o inibidor se liga ao sítio ativo da enzima impedindo sua ligação com o substrato; e não-competitiva, que é quando o inibidor e o substrato estão ligados em regiões diferentes da enzima ocasionado na não produção eficaz do produto, devido ao complexo ser enzima – inibidor - substrato. Já a inibição irreversível é quando há uma modificação covalente e definitiva no sítio de ligação ou no sítio catalítico da enzima.

OBJETIVO

Verificar a atividade da catalase na presença e na ausência de um íon metálico e distinguir entre inibição competitiva e não-competitiva.

MATERIAIS

Tubos de ensaio

Água oxigenada 20 volumes

Béquer

Caldo de batatinha

Pipeta Pasteur

Estante de tubo de ensaio

Solução CuSO4 20%

Gelo

Fósforo

METODOLOGIA

Foram realizados três métodos

Primeiro método:

Em um tubo de ensaio A foi colocado 5,0mL da solução de peróxido e em outro tubo de ensaio B foi colocado 2,5mL do caldo da batatinha. Ambos foram colocados em banho de gelo por 20 minutos, e após esse período transferiu-se a solução do tubo B para o tubo A. Agitou-se e então foi colocado novamente no banho de gelo. Esperar por 10 minutos.

Segundo método:

Em um tubo de ensaio C foi colocado 5,0mL da solução de peróxido de hidrogênio juntamente com 2,5mL do caldo da batatinha, depois agitado por 10 minutos.

Terceiro método:

Em um tubo de ensaio D foi adicionado 5,0mL de peróxido de hidrogênio e depois 2,5mL de solução de sulfato de cobre [CuSO4(aq.)]. Misturou-se bem e após isso foi acrescentado 2,5mL do caldo da batatinha. E então foi agitado por 10 minutos.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

No primeiro método depois de ter esperado a mistura do tubo B com tubo A durante 10 minutos no banho de gelo, pode-se observar que nada ocorreu isso porque com o auxílio do gelo ocorre a diminuição da temperatura que tem como consequência redução do grau de agitação das moléculas durante a reação, além disso, também teve o fato do caldo de batatinha ter oxidado levando a não eficiência do seu resultado. ( H2O + O2), porém o oxigênio não estava em grande quantidade, isso foi detectado porque foi utilizada a brasa de um fósforo e ao tocar nessas espumas não se obteve nenhuma resposta. Isso aconteceu devido ao caldo da batata. No segundo método, após o tubo de ensaio C ter sido agitado pôde-se observar que foram formadas espumas decorrentes da reação do peróxido de hidrogênio com a catalase, enzima presente na batatinha, que teve como produtos a água e o oxigênio (H2O2 + catalase batatinha ter oxidado então não se alcançou a quantidade suficiente de oxigênio para que a chama acendesse. Porém, se o caldo de batatinha estivesse de acordo para que ocorresse a reação, a chama do fósforo acenderia, pois teria quantidade suficiente de oxigênio, que é um gás comburente, para que a brasa entrasse em combustão.

No terceiro método, após o estímulo de agitação do tubo de ensaio D, pôde-se observar que nada ocorreu, isso porque o sulfato de cobre aquoso (CuSO4) é uma espécie de inibidor competitivo que ocupou o sítio ativo da enzima catalase, impedindo que o peróxido de hidrogênio se ligasse para que ocorresse a reação.