Esse relatório tem como objetivo a construção da curva de peso seco referente ao Lactobacillus casei no meio MRS.

1. Objetivo

Esse relatório tem como objetivo a construção da curva de peso seco referente ao Lactobacillus casei no meio MRS.

2. Metodologia

Após isolamento e caracterização dos microrganismos, nomeados como Lula e Pezão, a partir de leite fermentado comercial, foram feitos cultivos de ambos. Foram transferidas alçadas cheias para um Erlenmeyer contendo meio MRS autoclavados, os mesmos foram incubados a 37ºC a para que se possa obter um bom crescimento.

A partir do meio desenvolvido, foram feitas diluições de 100, 50, 25, 20 e 15 vezes. Foram medidas as absorbâncias das soluções diluídas para obter valores de densidade óptica, correspondentes a cada concentração.

Os meios também foram filtrados para determinar a massa celular contida nas alíquotas de volume conhecido. Com uma pipeta volumétrica, foram retirados 30 mL do meio crescido e homogeneizado. As alíquotas foram filtradas utilizando membranas de 0,2 μm de diâmetro de poro. Após a filtração, as membranas foram colocadas em recipientes de massa conhecida. Os recipientes foram secos até peso constante, através de infravermelho.

Determinada a concentração de cada microrganismo e as respectivas absorbâncias, foi construída uma curva de peso seco Abs (570 nm) x Concentração celular (g PS/L) e determinado o fator de conversão de absorbância em concentração celular.

3. Resultados e Discussão

Através das pesagens, foram obtidas as massas de célula do “Lula” e “Pezão”, e posteriormente, a concentração celular.

Nas tabelas 1 e 2 estão os valores das pesagens dos dois microrganismos já citados.

Placa + Membrana (g)	Pós-IV (1)	Pós-IV (2)	Pós-IV (3)	Pós-IV(4)	Massa de células (g)
43,088	43,388	43,117	43,121	43,120	0,0320
35,208	35,504	35,276	35,276	35,268	0,0600
41,360	41,370	41,417	41,410	41,410	0,0500
Média	0,04733

Tabela 1 – Determinação do peso seco do L. casei “Lula”.

Sua concentração é dada por:

C (g/L) = m (g) /V (L)

C (g/L) = 0,04733 g/ 0,03000 L

C (g/L) = 1,578 g/L

Tabela 2 – Determinação do peso seco do L. casei “Lula”

Placa + Membrana (g)	Pós-IV (1)	Pós-IV (2)	Pós-IV (3)	Pós-IV(4)	Massa de células (g)
67,042	67,413	67,145	67,100	67,098	0,0560
40,938	41,019	40,977	40,975	40,975	0,0370
48,943	48,978	48,991	48,989	48,898	-0,0450
Média	0,0465

E sua concentração é dada por:

C (g/L) = m (g) /V (L)

C (g/L) = 0,0465 g/ 0,03000 L

C (g/L) = 1,550 g/L

O valor negativo não foi considerado na média. Provavelmente, ocorreu um erro de manuseio durante a pesagem.

Através das medidas de densidade óptica de cada solução, foram obtidos os seguintes valores de absorbância para o Lula e Pezão, respectivamente:

Tabela 3 – Medidas de Absorvância do L. casei “Lula”, em 570 nm de comprimento de onda.

Amostra	Diluição	Concentração (g/L)	Abs 1 (570 nm)	Abs 2 (570 nm)	Abs média (570 nm)
1	100	0,01578	0,073	0,074	0,0735
2	50	0,03156	0,145	0,146	0,1455
3	25	0,06311	0,280	0,284	0,282
4	20	0,07889	0,320	0,321	0,3205
5	15	0,1052	0,383	0,382	0,3825

Amostra	Diluição	Concentração (g/L)	Abs 1 (570 nm)	Abs 2 (570 nm)	Abs média (570 nm)
1	100	0,01550	0,074	0,075	0,0745
2	50	0,03100	0,155	0,156	0,1555
3	25	0,06200	0,299	0,297	0,298
4	20	0,07750	0,312	0,313	0,3125
5	15	0,1034	0,410	0,409	0,4095

 Tabela 4 – Medidas de Absorvância do L. casei “Pezão”, em 570 nm de comprimento de onda.