O Relatório Espectrofotometria

Universidade Federal da Bahia[pic 1][pic 2]

Instituto de Química

Disciplina: QUIB15 – Química Analítica Instrumental IA

Docente: Maria das Graças Andrade Korn

Discente: Karine Souza de Jesus

Relatório

Determinação de ácido ascórbico em sucos de frutas

(PARTE II – Curva de calibração e

determinação das amostras)

Salvador

Março 2021

1. INTRODUÇÃO

        A espectrofotometria é uma técnica analítica que utiliza a luz para medir a concentração de espécies químicas, baseando-se na interação da matéria com a energia radiante. Dado que diferentes espécies têm padrões de absorção diferentes, a espectrofotometria possibilita identificar essas espécies com base no seu espectro. Permite também quantificá-las, uma vez que a quantidade de luz absorvida está relacionada com a concentração da espécie química.

        Nas aplicações espectrofotométricas, quando se usa energia monocromática em um simples comprimento de onda (λ), a fração de radiação absorvida pela solução, ignorando perdas por reflexão, será função da concentração da solução e da espessura da solução. Portanto, a quantidade de energia transmitida diminui exponencialmente com o aumento do caminho e o aumento da concentração ou da intensidade de cor da solução, chamada Lei de Lambert – Beer.

        A relação entre energia que atravessa (I) e energia incidente (I0) indica a transmitância (T) da solução que deve estar entre 0 e 1 (T=I0/I). Em espectrofotometria, utiliza-se a absorvância (A) como a intensidade de radiação absorvida pela solução, a qual é diretamente proporcional a concentração c da espécie absorvente na amostra. Assim tem-se a formulação da lei de Lambert –Beer.

 A= - log(Io/I) = Σbc 

        Na espectrofotometria, a fonte de radiação emite até a região ultravioleta do espectro e desta radiação selecionam-se comprimentos de onda definidos, os quais formam as bandas, com largura menor que 1nm. O instrumento utilizado para este procedimento é o espectrofotômetro, que é um aparelho que mede e compara a quantidade de luz absorvida ou transmitida por uma determinada amostra e usando um prisma, para separar a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda.

        Para se obter os dados sobre a absorção de uma amostra, ela é introduzida, com o auxílio de uma cubeta, no caminho óptico do aparelho e por ela é passada luz em certo comprimento de onda ou uma faixa de comprimentos de ondas, permitindo saber a quantidade de luz absorvida ou transmitida pela amostra. Para determinação da concentração de uma espécie em uma amostra por espectrofotometria, compara-se a absorvância da amostra com uma solução padrão, na qual já é conhecida a concentração da espécie química. Para isso é traçado um gráfico, conhecido como curva de calibração, utilizando um padrão diluído em de diferentes concentrações. No gráfico, a reta traçada, indica a proporcionalidade entre o aumento da concentração e da absorvância e a parte linear correspondente ao limite de sensibilidade do método espectrofotométrico para a espécie em questão.

        É preciso levar em consideração que a análise pode sofrer influência de alguns parâmetros como a natureza do solvente, temperatura, pH, concentração de eletrólitos e presença de interferentes e por isso seus efeitos precisam ser conhecidos e as condições de análise devem ser escolhidas de modo que as pequenas variações dessas grandezas não influenciem de forma considerável a absorvância.

        O Ácido Ascórbico (AA), popularmente conhecido como vitamina C, é um importante nutriente da alimentação humana devido ao seu potencial redutor. Devido a essa característica, o AA é capaz de reduzir íons Fe(III) à Fe(II), conforme equação abaixo:

        C6H8O6 + 2Fe3+ → C6H6O6 + 2Fe2+ + 2H + 

        O íon ferroso formado é capaz de formar complexos estáveis com reagentes orgânicos que absorvem radiação na região do UV-VIS, viabilizando assim a determinação indireta do ácido ascórbico. Entre esses reagentes, estão a 1,10-fenantrolina e 2-(5-Bromo-2-pyridylazo)-5-(diethylamino)phenol) (Br-PADAP). [1]

2. OBJETIVOS

2.1 Traçar a curva de calibração e determinar os parâmetros de validação;

2.2 Determinar a concentração de ácido ascórbico em amostras de frutas por espectrofotometria de absorção molecular no UV/Vis.

3. MATERIAIS E VIDRARIAS

IDENTIFICAÇÃO	CAPACIDADE	QUANTIDADE
Micropipeta	10 – 100 µL	01 un
Micropipeta	100 – 1000 µL	01 un
Ponteira para Micropipeta	10 – 100 µL	10 un
Ponteira para Micropipeta	100 – 1000 µL	10 un
Balão Volumétrico	10 mL	26 un
Cubeta de vidro	10 mm	02 un
Béquer	250 ml	01 un
Espátula	-----------	01 un
Peneira	-----------	01 un
Recipiente descartável (copo plástico)	-----------	04 un

4. EQUIPAMENTOS

IDENTIFICAÇÃO

Espectrofotômetro

Balança analítica

5. REAGENTES E SOLUÇÕES

IDENTIFICAÇÃO	CONCENTRAÇÃO	QUANTIDADE
Solução padrão de Fe(III)	1000 mg L-1	2 mL
Solução de ácido ascórbico	100 mg L-1	4 mL
Solução de ácido ascórbico	10 mg L-1	5 mL
Solução de ortofenantrolina	0,1% (m v -1)	9 mL
Br-PADAP	0,020% (m v -1)	15 mL
Tampão ácido acético/acetato de sódio	1 mol L-1 / pH 4,25	14 mL
Tampão ácido acético/acetato de sódio	1 mol L-1 / pH 4,75	15 mL
Solução EDTA	0,10%  (m v -1)	15 mL
Água ultrapura	-----------	300 mL
Amostra (extrato)	-----------	300-600 mg