Métodos de cromatografia

Técnicas de cromatografia

Definição

A cromatografia é um método físico-químico de separação que se fundamenta na migração diferencial dos componentes de uma mistura devido a diferentes interações entre duas fases imiscíveis: fase móvel (gás, líquido ou um fluido supercrítico) e fase estacionária (fixa, colocada em uma coluna ou numa superfície sólida). A cromatografia pode ser utilizada para a identificação de compostos, por comparação com padrões previamente existentes, para a purificação de compostos, separando-se as substâncias indesejáveis e para a separação dos componentes de uma mistura.

Classificação dos Métodos Cromatográficos.

Segundo a forma física do sistema cromatográfico: Cromatografia planar, cromatografia em coluna e centrífuga.

Segundo o modo de separação: adsorção, partição, troca iônica, exclusão ou misturas desses mecanismos.

Segundo a fase estacionária utilizada: Fase estacionárias sólidas, líquidas e quimicamente ligadas.

Segundo a fase móvel empregada:

Cromatografia líquida – Na cromatografia líquida clássica (CLC), a fase móvel é arrastada através da coluna apenas por força da gravidade, enquanto que na cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) se utilizam fases estacionárias de partículas menores, sendo necessário o uso de uma bomba de alta pressão para eluição da fase móvel.

Cromatografia gasosa - As separações podem ser obtidas por cromatografia gasosa simples (CG) e por cromatografia gasosa de alta resolução (CGAR). A diferença entre as duas reside nos tipos de colunas utilizadas. Enquanto na CGAR são utilizadas colunas capilares, nas quais a fase estacionária é um filme depositado na coluna.

Cromatografia supercrítica (CSC) - Utiliza-se um vapor pressurizado, acima da sua temperatura crítica.

Cromatografia em Papel

A cromatografia em papel (CP) é uma técnica de partição líquido–líquido, estando um eles fixado a um suporte sólido. O suporte é saturado em água e a partição se dá devido à presença de água em celulose (papel de filtro). Este método, embora menos eficiente que a CCD, é muito útil para a separação de compostos polares, sendo largamente usado em bioquímica. Utiliza-se pequena quantidade de amostra (microgramas a miligramas). As manchas podem ser reveladas por meio de luz UV, vapores de iodo, soluções de cloreto férrico e tiocianoferrato de potássio, etc) Cromatografia em papel com fase normal (papel é saturado com a fase estacionária polar, p. ex. água) e com fase reversa (papel é tratado com outro líquido, p.ex.: acetona e dimetilformamida, parafina, óleo, silicone, solventes orgânico).

Cromatografia em Camada Delgada

A cromatografia em camada delgada (CCD) é uma técnica de adsorção líquido–sólido. Nesse caso, a separação dos componentes da mistura ocorre em função da migração diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente, fixo numa superfície plana, por meio de uma fase móvel (um líquido ou misturas de líquidos). O fenômeno