A Técnica de biologia molecular

Entre os organismos veiculados pela água e que causam surtos de doenças diarreicas estão os protozoários Cryptosporidium spp que consiste de diferentes espécies e genótipos e está amplamente associado a infecções entéricas em diferentes indivíduos.

A transmissão direta (contato com pessoas ou animais infectados) ou indireta (ingestão de água contaminada e de alimentos contaminados),inalação dos oocistos) é favorecida por densidade populacional alta . Águas utilizadas em recreação também representam grande problema de saúde pública, em virtude do grande número de banhistas e da resistência de Cryptosporidium parvum aos desinfetantes colocados nelas, especialmente o cloro. O emprego de fezes de animais como adubo orgânico em culturas vegetais pode causar infecção direta pela formação de aerossóis ou contaminar águas superficiais e subterrâneas.

A ingestão de água contaminada mostra-se a principal via de infecção humana. O parasito tem distribuição mundial e pode ser encontrado tanto em países desenvolvidos como em desenvolvimento. A maioria das infecções humanas é causada por C. hominis e C. parvum, embora novos genótipos estejam sendo identificados, com sugestão de ciclos de transmissão diferentes: antroponótico e zoonótico. C. parvum e C. hominis podem sofrer recombinações genéticas dentro e entre genótipos isolados, detectadas por mini e macro satélites, assim como variações geográficas e temporais. A grande maioria dos surtos é causada por uma única espécie/genótipo de Cryptosporidium, enquanto que isolados de infecções esporádicas, algumas vezes, apresentam mais de uma espécie/genótipo.

No Brasil, o número de casos de criptosporidiose deve ser subestimado em razão do desconhecimento da doença, inclusive por médicos, assim como sua detecção inadequada ou pesquisa mediante solicitação dos laboratórios clínicos para, além da não procura por atendimento médico pelo individuo com diarreia, implicando na ausência de diagnóstico.

Os métodos mais comuns para detectar e quantificar Cryptosporidium spp. constam de etapas como a concentração de oocistos na amostra de água, seguida da purificação deles e a sua coloração por imunofluorescência direta.

A concentração de oocistos de Cryptosporidium spp. por centrifugação tem sido realizada em amostras de água, associando etapas de sedimentação com uma etapa de flutuação, sendo a pesquisa do oocisto feita em sua maioria no sedimento obtido de uma centrifugação em que foi usado o volume sobrenadante resultante da etapa anterior de flutuação, que por sua vez é realizada a partir do sedimento concentrado. A centrífugo-flutuação tem a finalidade de separar cistos ou oocistos de protozoários de resíduos sólidos na amostra e, quando realizada, os oocistos na amostra devem ser previamente concentrados por sedimentação através de várias lavagens na ausência do líquido flutuante para se obter um sedimento. A gravidade específica do gradiente é escolhida para que os microrganismos flutuem em sua superfície e para que os resíduos mais pesados sedimentem.

Vários fatores interferem na eficiência de recuperação de oocistos em água por processos de concentração por sedimentação ou flutuação, dentre eles a variação da densidade do oocisto, pois oocistos de baixa densidade provavelmente serão menos recuperados por técnicas de sedimentação e os oocistos de maior densidade serão menos eficientemente recuperados por técnica de flutuação.

Estudos epidemiológicos utilizando métodos moleculares têm relatado presença de C. parvum; C. hominis e C. meleagridis. Concluindo, PCR é requerida para detecção de menor número de oocistos, por ser mais sensível, fornecendo informações adicionais à microscopia e tem tido grande impacto na elucidação dos agentes causadores de criptosporidiose, particularmente na taxonomia, biologia, patogenia, epidemiologia, transmissão e tratamento, auxiliando os epidemiologistas na vigilância e determinação de fontes de infecção. vantagem do PCR é a rapidez, sensibilidade e especificidade,