Atividades Laboratoriais

ANEXO IV

PROCEDIMENTOS PARA CONTAGEM DE COLÔNIAS

1. INTRODUÇÃO

A aplicação de procedimentos de controle durante o processo analítico visa à garantia da confiabilidade do resultado final, assegurando a sua repetibilidade, precisão e exatidão.

A precisão e a exatidão do método também dependerão da correta observação e aplicação dos procedimentos padronizados estabelecidos para a área analítica.

A garantia da validade dos resultados da contagem estará assegurada quando os resultados dos controles indicarem não haver qualquer falha em nenhuma etapa do processo analítico.

2. RECOMENDAÇÕES GERAIS

2.1. Sempre utilizar mais de uma placa, seja uma duplicata da mesma diluição, seja duas ou mais diluições diferentes.

2.2. As contagens deverão ser realizadas imediatamente após o período de incubação das placas.

2.3. Na impossibilidade de realizar a contagem imediatamente após o período de incubação, manter as placas sob refrigeração em temperatura de 4ºC a 7ºC por um período não superior a 24 horas.

Esse procedimento não deve tornar-se uma prática rotineira.

2.4. Para a contagem, selecionar placas que contenham um número de colônias que se encontre dentro do intervalo de precisão e repetibilidade estabelecido pelo método em uso (por exemplo, 20 a 200 colônias, 25 a 250 colônias, etc).

2.5. As colônias deverão ser contadas com o auxílio de contador de colônias equipado com placa de vidro ou acrílico, com diâmetro compatível com o das placas utilizadas, dividido milimetricamente em quadrantes com 1 cm2 de área e com iluminação

artificial uniforme.

2.6. O contador de colônias deverá ter capacidade para aumento de 1 a 2 vezes, com dispositivo de regulagem de altura para melhor ajuste do foco, podendo ainda dispor de sistema eletrônico ou manual de registro das contagens.

2.7. O contador de colônias deverá estar localizado em local onde não haja incidência direta de luz sobre a plataforma de apoio da placa, para evitar possíveis enganos na identificação das colônias.

2.8. Utilizar o estereoscópio para observação de características morfológicas das colônias, para diferenciar microrganismos de partículas da amostra ou do meio e para seleção e isolamento de colônias.

2.9 Verificar sempre a proporcionalidade dos resultados obtidos nas diluições sucessivas.

3. REGRAS GERAIS PARA CÁLCULO E REGISTROS

3.1 Expressão de resultados de contagem; No cálculo das contagens, o resultado final será expresso emUFC/g ou mL, levando-se em conta a diluição empregada, da seguinte

maneira:

R = a x 10b UFC/g ou mL

R = resultado

a = os dois primeiros algarismos significativos, números de 0 a 9

b = expoente (0 a 10)

UFC = unidade formadora de colônias

g = grama e mL= mililitro

Exemplos:

Diluição 10-2 (1:100)

Média das contagens: 25 UFC

Resultado: 25 x 100 = 2.500 = 2,5 x 103 UFC/g ou mL

Diluição 10-3 (1:1.000)

Média das contagens: 38 UFC

Resultado: 38 x 1.000 = 38.000 = 3,8 x 104 UFC/g ou mL

O resultado final será expresso considerando-se os dois primeiros algarismos representativos, separados por vírgula. Os algarismos subseqüentes, quando existirem, deverão ser arredondados e transformados em potência de 10.

3.2 Arredondamento de resultados: Quando se fizer necessário, e visando não criar uma falsa idéia de precisão, aplicar a seguinte regra para a aproximação dos resultados:

3.2.1 Arredondar para cima o segundo algarismo ou o subseqüente quando o algarismo imediatamente após for superior a 5.

Exemplo:

Diluição 10-2

Média das contagens: 186 UFC

Arredondando-se o terceiro algarismo para cima tem-se como resultado:

190 x 100 = 19.000 = 1,9 x 104 UFC/g ou mL

3.2.2 Arredondar para baixo o segundo algarismo ou o subseqüente quando o algarismo imediatamente após for inferior a 5.

Exemplo:

Diluição 10-2

Média das contagens: 184 UFC

Arredondando o terceiro algarismo para baixo tem-se como resultado:

180 x 100 = 18.000 = 1,8 x 104 UFC/g ou mL

3.2.3 Nos casos em que o terceiro algarismo ou o subseqüente for igual a cinco, arredondar para baixo quando o segundo ou o subseqüente for menor ou igual a 5 e para cima quando for maior que 5.

Exemplos:

Diluição 10-2

Média das contagens: 185 UFC

Arredondando o terceiro algarismo para cima tem-se como resultado:

190 x 100 = 19.000 = 1,9 x 104 UFC/g ou mL

Média das contagens: 145 UFC

Arredondando o terceiro algarismo para baixo tem-se como resultado:

140 x 100 = 14.000 = 1,4 x 104 UFC/g ou mL

Média das contagens: 155 UFC

Arredondando o terceiro algarismo para baixo tem-se como resultado:

150 x 100 = 15.000 = 1,5 x 104 UFC/g ou mL

3.2.4 Arredondamento de resultados obtidos pela contagem de placas em duplicata de duas diluições diferentes.

Nas contagens de placas de duas diluições diferentes, o procedimento de arredondamento é semelhante ao da contagem de mesma diluição, isto é, só poderá ser efetuado após o cálculo da média das contagens, que será explicado a seguir nas regras específicas para contagem de colônias.

3.3 Resultados estimados

Nas contagens,