Caracterização De Aminoácidos

CARACTERIZAÇÃO DE AMINOÁCIDOS.

Os aminoácidos podem ser caracterizados pelo seu grupo ácido, grupo amino ou pelo radical. As reações devidas aos dois primeiros grupos são reações gerais de aminoácidos. As reações que caracterizam o radical são especificas para um dado aminoácido ou para seu grupo.

1) Reação de Ninhidrina

Esta reação é utilizada para verificar a presença de aminas em solução, dando positivo para proteínas, peptídeos, aminoácidos, aminas primárias e amônia.

Pipetou-se 5 ml da solução de proteína(claro do ovo) e colocou-se em um tubo de ensaio, juntou-se a este 1 ml de solução de ninhidrina a 0,2% e colocou-se para ferver aproximadamente por dois minutos.Quando os aminoácidos são aquecidos em solução contendo excesso de ninhidrina, todos aqueles que têm grupamento amino livre produzem um composto púrpura, conhecido como Púrpura de Rüehmann.

Em condições apropriadas, a intensidade da cor produzida é proporcional à concentração de espécies (aminoácidos, peptídeos ou proteínas) presentes.A ninhidrina usada na detecção de aminoácidos por ser característica da função amina primária, ela possui alto poder oxidante que reage com o aminoácido formando a coloração púrpura que nem sempre se apresenta com a mesma intensidade de cor.

Nossa amostra apresentou-se na com a cor púrpura sendo que a mesma apresentou-se positiva para a presença de grupamentos amino, revelando a existência de aminoácidos, peptídeos ou proteínas na amostra.

Observação: Existem dois aminoácidos que são exceções a essa reação: com a prolina e hidroxiprolina, que reagem formando um composto amarelo.

2) Reação Xantoproteica

Esta reação de coloração é específica para aminoácidos encontrados na composição de proteínas. A reação xantoproteica possui cadeia lateral contendo anéis aromáticos (tirosina, triptofano e fenilalamina).

Pipetou-se 3ml de solução de albumina de ovo e colocou-se em um tubo de ensaio e após adicionou-se 1ml de HNO3 concentrado e aqueceu-se com cuidado deixando ferver por um minuto, esfriou-se o tubo em agua corrente e adicionou-se com cuidado e lentamente NaOH a 10% e verificou-se a precipitação do conteúdo com formação de um anel na coloração amarela, sendo assim a amostra se apresentou positiva sendo que os aminoácidos presentes na amostra contem anel Benzênico na sua estrutura.

O benzeno reage lentamente com o ácido nítrico (HNO3) concentrado para dar o nitrobenzeno. Essa reação pode ser acelerada mediante aquecimento. Assim, aminoácidos que apresentem anel benzênico em sua cadeia lateral (assim como proteínas ou peptídeos que possuam esses aminoácidos em sua constituição) podem reagir com o ácido nítrico originando um composto amarelo.

Observação: a coloração amarela existe em meio ácido. Se deixarmos o meio mais alcalino, será observada uma coloração vermelho-alaranjada.

3) Reação Sakaguchi

Esta reação é utilizada para verificar a presença da arginina em solução e possui cadeia lateral contendo grupos básicos ( arginina,lisina,hidroxilisina e histidina).

Pipetou-se 3ml de solução de albumina de ovo e colocou-se em um tubo de ensaio e após adicionou-se 1ml de NaOH a 10 % e juntou-se a esta mistura 6 gotas de alfa-naftol 1%, acrescentou-se 1ml de hipoclorito de sódio a 0,5%.

Observou-se a precipitação da solução com formação de coloração avermelhada sendo positivo, pois o grupamneto guanidina presente na arginina reage em meio alcalino com o alfa-naftol e hipoclorito, resultando em