O Relatório do Queijo

Relatório do Queijo

INTRODUÇÃO

O grupo dos coliformes totais é um subgrupo da familia Enterobacteriaceae que inclui 44 gêneros e 176 espécies. No grupo dos coliformes totais estão apenas as entrebaterias capazes de fermentar a lactose com produção de gás, em 24 a 48 horas a 35°C. O grupo inclui cerca de 20 espécies, dentre as quais se encontram tanto bactérias originárias do trato gastrintestinal de humanos e outros animais de sangue quente (Escherichia coli), como também bactérias não entéricas (espécies de Citrobacter, Enterobacter, klebsiela e Serratia, dentre outras). O grupo dos coliformes termotolerantes, comumente chamados de coliformes fecais, é um subgrupo dos coliformes totais, restrito aos membros capazes de fermentar a lactose em 24 horas a 44,5-45,5°C, com produção de gás (SILVA et al,2010).

A maioria dos sorogrupos de E. coli faz parte da microbiota comensal do intestino dos mamíferos, no entanto, certos sorotipos patogênicos para o homem e para outros animais não são considerados como parte da microbiota intestinal. A transmissão das infecções causadas por E. coli seguem principalmente três vias: o contato direto com animais, o contato com humanos e o consumo de alimentos contaminados. A presença de E.coli em um alimento é um dado muito importante, pois é um indicador de contaminação fecal do produto e deve ser analisada com cautela, pois além de indicador, a espécie pode compreender cepas patogênicas, comumente envolvidas em surtos de DTA. A identificação das cepas patogênicas de E. coli baseia-se, sobretudo, na presença de genes de virulência associados a cada categoria do enteropatógeno utilizando, para tanto, métodos moleculares ( CALDORIN et al,2013).

Os métodos mais modernos diferenciam E. coli através da verificação da atividade da enzima β-glicurinidase, produzida por 96% das cepas. O método clássico de contagem de coliformes totais, termotolerantes em água e alimentos é o de Número Mais Provável (NMP), um método de análise quantitativo que permite determinar o NMP dos microrganismos alvo na amostra, através da inoculação de alíquotas dessa amostra em uma serie de tubos, contendo um meio de cultura liquido adequado ao seu crescimento. Já o método oficial da (AOAC), o Perfil tm (3M) é uma modificação da contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) em placas, composto por dois filmes estéreis, impregnados pelo meio de cultura e por substancias gelificastes solúveis em água fria. Ambas utilizam as mesmas técnicas microbiológicas, que são o enriquecimento em um ou mais caldos específicos e o posterior isolamento em meios sólidos gás (SILVA et al,2010).

OBJETIVO

Análise de coliformes e Escherichia coli pelo método Petrifilm (3M) em queijo, fazendo um paralelo desta técnica com a do Número Mais Provável (NMP).

MATERIAIS

Vidrarias e equipamentos

Béquer

Tubos de ensaio

Proveta

Erlenmeyer

Pipetas

Bico de Bunsen

Estufa

Balança semi-analítica

Alimento analisado:

Queijo Minas Frescal

-Solução diluente:

Água peptonada 0,1%- 1108 ml=1,1g

Petrifilm para coliformes e Escherichia coli (3M): identificação rápida

. METODOLOGIA

Antes de iniciar-se os devidos procedimentos, acendeu-se o bico de Bunsen, pois presença do mesmo na bancada é, também, indispensável para criar uma zona estéril onde na qual será efetuado todo o experimento, para diminuir ainda mais o risco de contaminação do trabalho. Os materiais presentes em bancadas já estavam devidamente esterilizados e identificados.

. Em um béquer, adicionou-se amostra de queijo com auxílio de espátula, pesando-se em balança semi analítica 25g. Transferindo-se para um erlenmeyer, contendo-se 225 ml de água peptonada 0,1%, e acrescentando-se água destilada aferida em proveta, homogeneizando-se por 1 minuto. .Adicionou-se com auxílio de pipeta 9 ml de agua peptonada 0,1% em três tubos de ensaios mantidos em estantes para tubo, identificando-se em 101 , 102, 10 3 e 104 ,reservando-se.Com auxílio de uma pipeta (2 ml) coletou-se 1ml diluída no erlenmeyer transferindo-se para o 1°tubo de ensaio (101),depois coletou-se 1 ml do primeiro tubo adicionando-se no tubo (10 2 ),em seguida coletou-se 1 ml do anterior adicionando-se no tubo(10 3 ).Após os procedimentos de diluições inoculou-se no filme interior, após inoculado cobriu-se com o filme superior, espalhando-se com uma leve movimento com os dedos a amostra diluída sobre o meio Petrifilm,identicado conforme as devidas diluições 101 , 10