Extração Dna

1 INTRODUÇÃO E JUSTIFICATIVA

Através de estudos e pesquisa se tem o conhecimento que vida depende; da capacidade das células: de armazenar , resgatar e traduzir as instruções genéticas necessárias para fazer e manter um organismo vivo. Esta informação hereditária, passada de uma célula suas células filhas na divisão celular e de geração em geração de organismos pelas células reprodutivas, estas instruções são armazenadas dentro de toda célula viva sob forma de genes.

Desde os primeiros estudos peculiares da genética como ciência no início do século XX, que a partir de estudos realizados com fungos simples, foi descoberto que a informação genética consiste de instruções para fazer proteínas, o qual o DNA controla a sua produção, que são macromoléculas que realizam muitas tipos de funções celulares: servem como blocos para construir estruturas celulares

Atualmente, muito estudado, o ácido desoxirribonucleico (DNA) é utilizado para diversos fins desde investigações criminais, com técnicas forenses, até a produção de proteína em larga escala de baixo custo, gerando grandes quantidades de agentes terapêuticos. como a insulina para o tratamento da diabetes.

Utilizado no controle do produto final e do processo produtivo da fermentação para produção de aminoácidos, com a análise microbiológica conhecida como transformação.Onde avalia-se o microrganismo não patogênico, foi inativado no produto final, que seria o caldo fermentando com alta concentração de aminoácidos ,nesta análise é usado o ácido desoxirribonucleico (DNA) como controle positivo dentro da analise.

Para um teste de DNA ocorrer, na primeira fase é realizado o isolamento e extração de moléculas de DNA, a partir das células que residem dentro do microorganismo analisado ( bactéria ).

A obtenção do plasmideo através da celula bacteriana segue uma série de passos e protocolos de extração; obtendo o plasmideo no final do processo através de extração e purificação.

Após o término do processo de extração do plasmideo deverá ser analisado a sua qualidade, através de análise de transformação; que avalia a funcionalidade deste plásmidio extraido.

Existem varios métodos empregados para a extração de DNA, alguns

em escalas industriais, porém somente será abordado metodologia de extração de Dna por lise alcalina, que baseia-se na diferença de desnaturação, em condições alcalinas usando( pH próximo a 12) entre o DNA plasmidial circular e o cromossomial de alto peso molecular.

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2 OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GERAL

Realizar a extração do plasmideo da bactéria Escherichia coli, determinar sua concentração e aplicá-lo na análise de transformação para validar o seu uso.

2.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

• Determinar concentração do plasmídio extraído da bactéria Escherichia coli através do espectrofotômetro.

• Calcular a diluição do plasmideo que será usado para analise de transformação.

• Realizar análise de transformação e validar o seu uso.

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3 FUNDAMENTOS TEÓRICO

3.1 COMPOSIÇÃO DAS CÉLULAS

A células são compostas por núcleo e citoplasma, sendo em seu núcleo contido por material genético das células; no citoplasma contém basicamente as organelas responsáveis por suas funções e pela síntese das proteínas, que ocorre nos ribossomos(Krieg,1996).

Os organismos unicelulares são chamados de procariotos; como bactérias não apresentam membrana nuclear e sim membrana citoplasmática bacteriana, é uma estrutura com aproximadamente 8 nm de espesssura, vital para célula ,protegendo o citoplasma do meio externo da célula; as plantas e animais possuem um núcleo verdadeiro, denominados organismos eucariotos, onde situa-se o código genético, ou DNA. As regras gerais que regem a informação genética se aplicam a todos os organismos vivos (Roselino., 2008). Abaixo a figura 1 mostra um modelo (esquema ) de uma célula bacteriana.

Figura 1 :Célula bacteriana

Fonte:( MELO.J,2001)

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As bactérias são as células mais simples onde sua membrana plasmática atua com uma barreira seletiva que impede a passagem livre de moléculas, permitindo a concentração de metabólitos específicos dentro da célula (Trabulsi, ET al,2005).

Os vírus, que são ainda mais simples do que as bactérias, não podem sobreviver de forma independente. Os vírus são formados basicamente pelas moléculas de DNA ou de ácido ribonucléico (RNA), empacotadas em uma cápsula de proteína. Os vírus mais estudados são os bacteriófagos, ou fagos, que se perpetuam ao infectar uma bactéria (Howell, 2013).

Vírus, bactérias e outras formas de vida utilizam o código genético para a expressão protéica. Da mesma forma que uma bactéria aceita a infecção de um vírus, permitindo a duplicação do DNA viral e a síntese das proteínas codificadas, um gene humano pode também ser introduzido em uma bactéria, resultando a produção de proteína em grande quantidade, configurando a engenharia genética. Assim, a estrutura da molécula DNA é semelhante nos vírus, bactérias, plantas e seres humanos (Roselino, 2008).

Um gene representa a unidade codificadora de uma proteína. O DNA, molécula composta por vários genes, é empacotado por proteínas – histonas –, formando os nucleossomos. Cada cromossomo é formado por única molécula de DNA de fita dupla na forma circular (Roselino., 2008).

Os organismos multicelulares se desenvolvem a partir de uma única célula, o zigoto. Como as células se multiplicam por mitose, todas as células têm o mesmo número de cromossomos e de genes, e a mesma informação genética da célula inicial, salvo as mutações que podem ocorrer no decorrer do processo (Borzani,2001).

Cada celula bacteriana contém somente um cromossomo, consistindo em uma unica molecula de DNA de fita dupla na forma circular, além do cromossomo a celula bacteriana pode apresentar uma ou mais estruturas de DNA denominado