ATIVIDADE AMILÁSICA EM MEIO DE CULTIVO SÓLIDO

Descrição do procedimento

A atividade amilásica foi realizada utilizando meio APY com a seguinte composição: 1% (m/v) de amido, 0,25% (m/v) de extrato de levedura, 0,25% (m/v) de peptona e 1% (m/v) de ágar. As linhagens foram inoculadas no centro do meio de cultivo e incubadas à 28°C por até 48 horas. Após este período as placas foram incubadas a 35°C por 1 hora, e então sobre as placas verteu-se uma solução de iodeto de potássio (0,3% m/v de iodo e 1% m/v de iodeto de potássio) no qual reagiu por 2 minutos. Em seguida, o excesso da solução é drenado e o halo, indicativo da atividade enzimática, é mensurado de acordo com a formação de uma zona pálido ao redor da colônia (STRAUSS et al., 2001).

REFERÊNCIA

STRAUSS, M. L. A. et al. (2001). Screening for the production of extracellular hydrolytic enzymes by non-Saccharomyces wine yeasts. Journal of Applied Microbiology. Oxford, v. 91, p. 182-190.

Protocolo

1. Dissolver em 100mL de água destilada 1g de amido, 0,25g de extrato de levedura e 0,25g de peptona, homogeneizar bem;

2. Verificar pH, ajustar para 5.0;

3. Adicionar ao final 1g de Agar-agar e homogeneizar;

4. Esterilizar em autoclave a 121°C por 15 minutos;

5. Na capela de fluxo laminar verter 20mL do meio em placas de Petri esterilizadas e aguardar solidificação;

6. Com o auxílio de um bisturi estéril dispor um disco de micélio de 5mm de um fungo previamente inoculado em meio de cultura;

7. Incubar em estufa DBO a 28°C por até 48 horas;

8. Observar crescimento micelial e medir diâmetro do fungo;

9. Incubar as placas a 35°C por 2 horas;

10. Verter nas placas uma solução de iodeto de potássio (0,3% de iodo e 1% de iodeto de potássio) e deixar reagir por 5 minutos;

11. Retirar a solução das placas e verificar formação de um halo translúcido ao redor da colônia, se positivo, mesurar o diâmetro do halo.