TESTE COM ENZIMA, PROPRIEDADES DA UREASE

INSTITUTO FEDERAL DE ENSINO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA DO PIAUÍ

DEPARTAMENTO DE FORMAÇÃO DE PROFESSORES, LETRAS E CIÊNCIAS

CURSO SUPERIOR DE LICENCIATURA EM QUÍMICA

MÓDULO: VII

DISCIPLINA: BIOQUÍMICA

PROFESSOR: DR. JOAQUIM SOARES DA COSTA JÚNIOR

TESTE COM ENZIMA, PROPRIEDADES DA UREASE

VALTER OLIVEIRA SOUSA

TERESINA, MAIO DE 2014

RESUMO

Nesse experimento foi realizado 5 testes, sendo que os mesmos mostraram as propriedades da Urease, que hidrolisa a uréia em CO2 e 2NH3.

1. INTRODUÇÃO

As enzimas são um grupo de substâncias orgânicas de natureza normalmente protéica (existem também enzimas constituídas de RNA, as ribozimas), com atividade intra ou extracelular que têm funções catalisadoras, catalisando reações químicas que, sem a sua presença, dificilmente aconteceriam. Isso é conseguido através do abaixamento da energia de ativação necessária para que se dê uma reação química, resultando no aumento da velocidade da reação e possibilitando o metabolismo dos seres vivos. A capacidade catalítica das enzimas torna-as adequadas para aplicações industriais, como na indústria farmacêutica ou na alimentar. Praticamente todas as reações no organismo são mediadas por enzimas sem sofrerem alterações no processo global. Dentre as muitas reações biológicas energeticamente possíveis, de forma seletiva, as enzimas canalizam reagentes (os substratos) para rotas úteis. Logo as enzimas comandam todos os eventos metabólicos (CHAMPE, 2006).

Em sistemas vivos, a maioria das reações bioquímicas dá-se em vias metabólicas, que são sequências de reações em que o produto de uma reação é utilizado como reagente na reação seguinte. Diferentes enzimas catalisam diferentes passos de vias metabólicas, agindo de forma concertada de modo a não interromper o fluxo nessas vias. Cada enzima pode sofrer regulação da sua atividade, aumentando-a, diminuindo-a ou mesmo interrompendo-a, de modo a modular o fluxo da via metabólica em que se insere. O ramo da Bioquímica que trata do estudo das reações enzimáticas é a Enzimologia. (VOET, 2006).

As enzimas convertem uma substância, chamada de substrato, em outra denominada produto, e são extremamente específicas para a reação que catalisam. Isso significa que, em geral, uma enzima catalisa um e só um tipo de reação química. Consequentemente, o tipo de enzimas encontradas numa célula determina o tipo de metabolismo que a célula efetua. O aceleramento da reação pode ser da ordem dos milhões de vezes: por exemplo, a enzima orotidina-5-fosfato descarboxilase diminui o tempo da reação por ela catalisada de 78 milhões de anos para 25 milissegundos. Como são catalisadores, as enzimas não são consumidas na reação e não alteram o equilíbrio químico dela. A atividade enzimática pode depender da presença de determinadas moléculas, genericamente chamadas cofatores. A natureza química dos cofatores é muito variável, podendo ser, por exemplo, um ou mais íons metálicos (Fe), ou uma molécula orgânica (como a vitamina B12). Estes cofatores podem participar ou não diretamente na reação enzimática (DIAS DE SOUZA)

A uréase é uma enzima que catalisa a hidrólise da uréia em dióxido de carbono e amônia. A reação é a seguinte:

(NH2)2CO + H2O → CO2 + 2NH3

Em 1926 James Summer mostrou que a uréase era uma proteína. A uréase pode ser encontrada em bactérias, leveduras e várias plantas superiores. Até 1926, James Summer cristalizou a urease de feijão-soja, a qual catalisa a hidrólise de uréia e forma NH3 e CO2, e demonstrou que tais cristais eram constituídos de proteínas. Desde então, os estudos em Enzimologia têm amplamente demonstrado que as enzimas em sua maioria são proteínas. (VOET, 2006).

Objetivo: Reconhecer as propriedades da uréase e confirmar como a mesma atua sobre a uréia, sua identificação com o biureto, desnaturação e especificidade.

2. MATERIAIS E MÉTODOS

MATERIAIS

 Tubos de ensaio;

 Pipetas graduadas;

 Banho-maria;

 Água destilada;

 Solução de Uréase;

 Solução de Biureto;

 Solução de Uréia 0.4 M pH 7.0;

 Solução de Tiouréia 0.4 M pH 7.0;

 Solução de HgCl2 5%.

MÉTODO

Reação da urease com o Biureto

Prepararam-se os tubos seguintes:

Tubo A: 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de solução de urease

Tubo B: 1 mL do reativo de Biureto + 3 gotas de água destilada

Teste da atividade

Prepararam-se os seguinte tubos:

Tubo A: 1 mL do substrato (solução de uréia 0,4 M pH 7,0 contendo o indicador vermelho de fenol) + 3 gotas da solução de urease

Tubo B: 1 mL do substrato + 3 gotas de água destilada. Misturou-se Aguardou-se cerca de 2 min.

Teste da especificidade

Colocou-se em um tubo de ensaio, 1 mL da solução de tiouréia 0,4 M pH 7,0 (contendo vermelho de fenol como indicador) + 3 gotas da solução de urease. Misturou-se e aguardou-se 2 min.

Desnaturação pelo calor

Colocou-se